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冷凍真空干燥保藏法又稱冷凍干燥保藏法,簡(jiǎn)稱凍干法。它通常是用保護(hù)劑制備擬保藏菌種的細(xì)胞懸液或孢子懸液于安瓿(ānbù )管中,再在低溫下快速將含菌樣凍結(jié),并減壓抽真空,使水升華將樣品脫水干燥,形成*干燥的固體菌塊。并在真空條件下立即融封,造成無(wú)氧真空環(huán)境,zui后置于低溫下,使微生物處于休眠狀態(tài),而得以長(zhǎng)期保藏。常用的保護(hù)劑有脫脂牛奶、血清、淀粉、葡聚糖等高分子物質(zhì)。
由于此法同時(shí)具備低溫、干燥、缺氧的菌種保藏條件,因此保藏期長(zhǎng),一般達(dá)5~15年,存活率高,變異率低,是目前被廣泛采用的一種較理想的保藏方法。
恢復(fù)培養(yǎng)冷凍干燥菌種的方法
一、安瓶管開(kāi)封
1.用浸過(guò)75%酒精的脫脂棉擦凈安瓿管。
2.用火焰將安瓿管頂端適度加熱。
3.滴無(wú)菌水至加熱的安瓿管頂端使玻璃開(kāi)裂。
4.用挫刀或鑷子敲下已開(kāi)裂的安瓿管的頂端。
二、菌株恢復(fù)培養(yǎng)
1.用無(wú)菌吸管,吸取0.3~0.5ml適宜的液體培養(yǎng)基,滴人安瓿管內(nèi),輕輕振蕩,使凍于菌體溶解呈懸浮狀。
2.取0.1~0.2ml菌體懸浮液,移植于適宜的瓊脂斜面/平板培養(yǎng)基上,剩余的菌液,注入適宜的液體培養(yǎng)基內(nèi),然后在建議的溫度下培養(yǎng)。
3.若未能活化,或活化后有疑問(wèn)時(shí),請(qǐng)于收到菌種1個(gè)月內(nèi),通知營(yíng)養(yǎng)與食品安全所,補(bǔ)寄事宜。
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