摘要：在過去的四年半中，多種實驗性的生物治療方法獲得了商業(yè)注冊。但是生物仿制藥的出現(xiàn)，才是生物制品批準領(lǐng)域中的zui大轉(zhuǎn)變。

在過去的四年半，新的生物藥的批準率下降了。從2006年起，只有25個全新的生物藥實體（NBE）在美國或歐洲批準上市；期間總共批準了58份申請（包括生物仿制藥和“me too”化合物）。現(xiàn)在商場上的生物藥數(shù)目已經(jīng)超過200個了。

我們之前的調(diào)查發(fā)現(xiàn)，zui大的變化來自于生物仿制藥的崛起。在歐洲共批準了14個這樣的產(chǎn)品，生物仿制藥監(jiān)管法規(guī)正在其它國家逐步確立，包括在美國。

在過去四年商業(yè)注冊的實驗性的生物治療中，包括了*個癌癥疫苗（預(yù)防和治療性），*個雙特異性單克隆抗體。我們甚至還在期待*個基因治療產(chǎn)品的批準；基于小干擾RNA（siRNAs）、人類胚胎干細胞（hESC）和可誘導(dǎo)干細胞（iPS）的產(chǎn)品仍然很有前景。

用于生產(chǎn)生物制品的體系種類也有了很大的進步：*個由昆蟲細胞和酵母（Pichia pastoris） 細胞生產(chǎn)的產(chǎn)品；基于酵母和植物細胞的生產(chǎn)系統(tǒng)已用于生產(chǎn)基因工程改造過的糖基化的產(chǎn)品。生產(chǎn)上游和下游處理的流線性化改進也十分顯著，特別值得一提的是可拋棄型系統(tǒng)的廣泛使用。

在接下來的部分，我將提供zui近4年半（從2006年1月到2010年6月）新批準上市的生物藥名單，類型及其針對的適應(yīng)癥。與之前的那篇文章一樣，并沒有包括組織工程產(chǎn)品，因為FDA將它劃分為純醫(yī)藥器械類型。

新上市產(chǎn)品

在這四年半中，歐洲和美國批準上市的58個生物藥中包括：30個激素、生長因子、調(diào)節(jié)分子，13個單抗類產(chǎn)品，4個血液相關(guān)蛋白，2個亞單位疫苗，9個其它類產(chǎn)品（包括融合蛋白和治療用酶）。平均一年批準約13個產(chǎn)品上市表明該領(lǐng)域是充滿生機的。進一步分析，這其中40%（25個）是全新生物藥分子（NBE）；近50%（28個）是先前批準的生物藥的仿制藥、me too化合物。此外，5個產(chǎn)品是新批準了適應(yīng)癥（2006年之前已批準了其它適應(yīng)癥）。

4年半中批準了25個全新生物藥與先前文章相比并不容樂觀（03-06三年間批準了27個；03年前半年批準了30個）。2008年特別令人失望，只有四個全新的生物藥獲得美國批準：Arcalyst，Cimzia，Nplate，Recothrom；除去這四個，歐洲實際上甚至沒有全新生物藥上市。

雖然這樣短期內(nèi)的統(tǒng)計數(shù)據(jù)難以描繪出未來發(fā)展的大方向，但是可以看出批準上市的新生物藥實體總數(shù)呈下降趨勢，這是令人沮喪的。此外，這些新批準的生物藥難以成為重磅炸彈級產(chǎn)品，因為許多產(chǎn)品是作為孤兒藥開發(fā)的。只有四個產(chǎn)品：Arzerra，Removab，Provenge，Vectibix的適應(yīng)癥是癌癥；另外有兩個宮頸癌疫苗Cervarix和Gardasil是預(yù)防癌癥的。生物仿制藥和reformulated（類似藥物）將大量涌入一個早已充滿競爭的市場。例如，這期間共有八個EPOs的生物仿制藥獲得上市許可；而之前已經(jīng)有五個EPOs產(chǎn)品。競爭將會相當激烈，即便EPO的*約有100億美元/年。與此類似，filgrastim（非格司亭）有6個仿制藥上市，適應(yīng)癥是嗜中性白細胞減少癥，將與市場上已有的三個filgrastim類產(chǎn)品展開競爭。

即便存在競爭，生物制藥行業(yè)整體上仍然呈現(xiàn)顯著的增長。2007年，生物藥的總銷售額為940億美元，現(xiàn)已發(fā)展成為一個6000億美元的制藥產(chǎn)業(yè)。重組治療性蛋白（不包括抗體）2009年總計銷售額為610億美元，單克隆抗體2009年銷量增長380億美元，達到990億美元。

在zui為的重磅炸彈級產(chǎn)品中，治療癌癥的單抗占據(jù)了主要位置：Rutuxan，Herceptin，Avastin，Erbitux，Vectibix，此外還有靶點為TNF的Enbrel，Remicade，Humira和Cimzia。這兩組產(chǎn)品2009年的銷售額都達到了180億美元。緊隨其后的是，胰島素及其類似物，總銷量約133億美元。*三的是EPOs類產(chǎn)品，2009年總銷量為95億美元。2009年生物藥銷量排行榜上，*種有5個，甚至前五中有4個都是單抗類產(chǎn)品，印證了該類產(chǎn)品在生物藥行業(yè)的杰出表現(xiàn)。（單品種藥物銷量*0排行中，單抗都能占4個（不算Enbrel）。）

分開來看，四年半中歐盟批準了49個生物藥。包括14個生物仿制藥，8個reformulated或me too產(chǎn)品，還有5個先前被美國批準的產(chǎn)品；所以實際上只有22個新生物實體。雖然歐盟監(jiān)管系統(tǒng)對全新藥物的上市要求作出了明確規(guī)定，四年半間仍有120個這樣的產(chǎn)品獲準上市，所以新生物實體只占總數(shù)的18%（與03-06年的數(shù)據(jù)22%相比，下降了）。

四年半間，美國批準了21個新生物實體的上市要求。同期共有99個全新藥物上市，新生物實體所占比例為21%（與03-06年的數(shù)據(jù)24%相比，也下降了）。

同期美國批準了11個reformulated或me too生物藥上市，使得市場中類似藥物達到了32個。僅看生物藥批準數(shù)量，歐盟（49個）比美國（32個）多，主要是因為歐盟批準的生物仿制藥更多。

除Recothromb外，這篇文章回顧時間內(nèi)所有新批準的生物實體都是注射使用的。Recothromb（重組人*）的適應(yīng)癥為輕微手術(shù)中出血并直接應(yīng)用在出血部位。輝瑞公司2006年獲批的吸入式胰島素產(chǎn)品Exubera可以說是吸入式生物藥的分水嶺，在Exubera撤市以后，Novo Nordisk和Lilly也中斷了研發(fā)吸入式胰島素產(chǎn)品。僅有MannKind公司仍然堅持開發(fā)吸入式胰島素產(chǎn)品Afrezza，F(xiàn)DA也開始對其產(chǎn)品進行上市審批。

新批準的抗體

25個批準上市的新生物實體中有13個是抗體。2009年是值得紀念的一年，因為共有7個單抗產(chǎn)品通過審批在歐盟或美國上市。其中四個：Arzerra，Ilaris，Simponi和Sara是全人抗體。之前僅有2個全人抗體獲批，分別是Vectibix（2006年）和Humira（2000年）。另外值得注意的是Removab，它是上市的*個雙特異性抗體，由歐盟于2009年批準上市。

雖然在這四年半間，13個單抗批準上市是令人高興的一件事。但是這些產(chǎn)品要么是面對不大的市場需求，要么就是面對已有產(chǎn)品的激烈競爭。例如，Ilaris和Soliris都是孤兒藥，而Cimzia和Simponi要面對先前上市的3個TNF-α抑制劑（Humira, Enbrel和Remicade）的競爭。TNF-α抑制劑主要是用于治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和Crohn diease（炎癥性腸?。?，這是一個利潤豐厚的市場?，F(xiàn)今的風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎市場約為110億美元，今年年底炎癥性腸病的生物藥治療市場也將達到50億美元。

腫瘤疫苗

批準的兩個腫瘤疫苗也是里程碑事件。兩個宮頸癌疫苗Gardasil和Cervarix針對的是人乳頭瘤病毒HPV。HPV是宮頸癌的主要致病原因，宮頸癌是僅次于乳腺癌的女性第二大殺手。HPV通過性接觸廣泛傳播，50%的年輕女性在被傳播五年內(nèi)變?yōu)閟exually active。兩種HPV亞型HPV 16和HPV 18被認為是高度致癌的，導(dǎo)致了約70%的宮頸癌。平均每年新診斷出50萬例宮頸癌，每年導(dǎo)致約30萬人死亡。Cervarix是二價疫苗，含有重組的人乳頭狀瘤病毒亞型16和18衣殼蛋白L1，Gardasil是一種四價疫苗，含有HPV亞型6，11，16和18重組的衣殼蛋白。除了預(yù)防宮頸癌，Gardasil還能提供對生殖器疣的預(yù)防，因為90%的生殖器疣都是由HPV亞型6，11造成的。行業(yè)分析師預(yù)測這些疫苗的年銷量可能超過10億美元，即便這兩種疫苗在推廣過程中可能遭遇道德、宗教問題。

*個治療性細胞疫苗Dendreon公司生產(chǎn)的Provenge，適應(yīng)癥是轉(zhuǎn)移性前列腺癌，在經(jīng)過艱辛的審批道路過后，于2010年獲得批準在美國上市。Provenge用標記物CD52濃縮來自病人的細胞，用重組前列腺酸性磷酸酶-巨噬細胞集落刺激因子（PAP-GM-CSF）融合產(chǎn)物，體外激活來自病人的細胞，然后重新注入病人體內(nèi)。因為這種自體細胞療法面臨生產(chǎn)擴大的難題，公司只計劃在*年里生產(chǎn)2000劑量的產(chǎn)品，只能為一小部分前列腺癌患者服務(wù)。

生物仿制藥

早在2000年，歐盟就生物仿制藥的批準上市制定了相關(guān)的法律。歐盟藥物機構(gòu)（EMA）發(fā)展了配套的主要法規(guī)和產(chǎn)品特異性的指導(dǎo)方針。歐盟要求生物仿制藥必須提供和原研藥的比較研究數(shù)據(jù)。生物仿制藥的申請檔案（相對于原研藥）必須含有全程質(zhì)量監(jiān)督模塊（比如說生產(chǎn)、檢驗的細節(jié)信息）和簡略的臨床、非臨床數(shù)據(jù)模塊。歐盟法規(guī)的全面性已經(jīng)經(jīng)過了14個生物仿制藥的驗證，包括2個人重組生長因子（hGH），7個白細胞集落刺激因子（G-CSFs; filgrastims），5個EPO生物仿制藥。證明了開發(fā)含大量糖基化復(fù)合物的生物仿制藥的可行性。EPO有1個O-和3個N-糖基化位點，并且糖基可占到EPO分子量的40%。盡管具有如此的復(fù)雜性，EPO的生物仿制藥展現(xiàn)出了與原研藥相近的糖基化模式，并達到了歐盟生物仿制藥的監(jiān)管法規(guī)。但在本文回顧的2006-2010年間，歐盟拒絕、撤銷了5個生物仿制藥上市申請。

如今，歐盟的人類藥物產(chǎn)品委員會的生物仿制藥監(jiān)管者正在更新EPO仿制藥的指導(dǎo)方針，以及完善卵泡刺激激素（FSH）、干擾素-β、單抗的指導(dǎo)方針。單克隆抗體的分子量、結(jié)構(gòu)、功能的復(fù)雜性使得發(fā)展單克隆抗體藥物的生物仿制藥充滿挑戰(zhàn)。然而*代單抗產(chǎn)品即將面臨到期，包括：Herceptin, Rituxan, Remicade 和Humira，巨大的市場價值使得它們成為生物仿制藥的目標。盡管歐盟關(guān)于單抗的指導(dǎo)方針不會在近幾個月完成，人類藥物產(chǎn)品委員會已經(jīng)在為開發(fā)單抗的生物仿制藥提供系統(tǒng)的通告。

生物仿制藥在美國的發(fā)展更為艱辛，但是在奧巴馬總統(tǒng)簽署生效的醫(yī)改法案中，已經(jīng)批準了其審批的大致架構(gòu)。在未來幾年，批準生物仿制藥上市的步伐將大為加快。制藥企業(yè)諸如Merck, Cangene, Sandoz, Teva, Dr Reddy’s 和Biocon公司已經(jīng)準備著搶占生物仿制藥這塊市場。其他地區(qū)，如加拿大也在發(fā)展生物仿制藥監(jiān)管法規(guī)，澳大利亞則直接采用歐盟的法規(guī)，日本、瑞士、土耳其和幾個其他地區(qū)也采取相似的法規(guī)。

現(xiàn)在仍然不知道，生產(chǎn)生物仿制藥的與先前的爭論、開發(fā)投入是否對等。生物仿制藥可能比原研藥節(jié)約10-30%的費用，但也有人預(yù)測原研產(chǎn)品仍將*的大部分份額。2008年，歐盟的生物仿制藥市場約6000萬美元，估計到2013年，美國的生物仿制藥市場將達到3000萬美元。此外，生物仿制藥在其他地區(qū)的市場也將占據(jù)相當?shù)姆蓊~。生物仿制藥的銷售額在2007年已經(jīng)超過了13億美元（10億歐元）。到2016年，價值約332億美元（250億歐元）的生物制品將失去保護。到時候在歐盟和美國，單克隆抗體和其他重磅炸彈級產(chǎn)品的仿制藥出現(xiàn)會將生物仿制藥*。一些分析人士預(yù)測多個生物仿制藥將會成為重磅炸彈級產(chǎn)品，到2017年將達到13億美元（10億歐元）的銷售額。

生物藥生產(chǎn)系統(tǒng)

通過分析2006-2010批準的生物藥，可以發(fā)現(xiàn)大部分生物藥仍然是通過哺乳動物細胞和大腸桿菌生產(chǎn)的，這兩者仍然是生物制藥領(lǐng)域生產(chǎn)系統(tǒng)的主力。在批準的58個產(chǎn)品中，32個是在哺乳細胞（主要是CHO）中生產(chǎn)的，17個是在大腸桿菌中生產(chǎn)的，4個是釀酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）中生產(chǎn)的：liraglutide，Gardasil，Valtropin，active ingredient in Novolog mix insulins。Atryn（抗*）仍然是轉(zhuǎn)基因動物生產(chǎn)生物藥的*代表；Macugen（哌加他尼）則是通過直接合成的生物藥的*代表。該領(lǐng)域的進步包括：在baculovirus-insect cell 系統(tǒng)中生產(chǎn)的Cervarix和Provenge’s fusion protein獲準上市；在巴斯德酵母（P. pastoris）中生產(chǎn)的Kalbitor獲準上市。

另外至少有2個用植物生產(chǎn)的重組蛋白（CaroRx和人造血內(nèi)因子）獲得歐盟批準用于醫(yī)療保?。ǚ菄栏褚饬x的藥物）。CaroRx是一個單抗，特異性的結(jié)合于變形鏈球菌（Streptococcus mutans），而變形鏈球菌是細菌性蛀牙的主要起因。將產(chǎn)品用于牙齒表面，能阻止細菌黏附，減少齲齒的發(fā)生率。人造血內(nèi)因子被批準作為膳食添加劑，用于治療*12缺乏。

另一個里程碑是基于植物生產(chǎn)的注射性藥物很可能獲得批準。Protalix Biotherapeutics公司的Taligurase alfa（用培養(yǎng)的胡蘿卜細胞生產(chǎn)的重組葡糖腦苷酯酶）正在進行臨床3期實驗，是該領(lǐng)域很有力的競爭者。葡糖腦苷酯酶替代治療通常用于治療高雪氏癥（Gaucher disease），這是一種罕見的溶酶體存儲失調(diào)疾病?，F(xiàn)有的產(chǎn)品是從胎盤提取或用CHO細胞重組表達的。通過這兩種方式得到的產(chǎn)品在下游提純中需要經(jīng)過外切葡萄糖苷酶處理，以除去產(chǎn)品糖基化組分中的唾液酸末端。這樣做能暴露出甘露糖末端，能促進macrophages（靶細胞）通過細胞膜上的甘露糖受體直接吸收藥物。通過植物細胞生產(chǎn)的Taligurase alfa，通過植物*的C末端信號肽，在生物合成之后儲存于植物液泡。通過植物表達的產(chǎn)物的糖基化組分自然帶有甘露糖末端，與通過外切葡萄糖苷酶處理的一樣。因此在下游處理中能減少外切葡萄糖苷酶處理的步驟。

蛋白質(zhì)工程

2006-2009年批準的25個新生物實體中，有17個通過蛋白質(zhì)工程進行過修飾。在批準的11個抗體中，有6個是全人抗體，1個是雙特異性抗體，剩下的都是人源化抗體。兩個單抗片斷（Cimzia和Scintimun）也獲得了批準，Scintimun用于診斷，是由一個鼠抗衍生而來。而Cimzia則是人源化、PEG修飾的；這個anti–TNF-α Fab 片斷zui初于2008年批準用于Crohn’s disease，09年5月又批準它用于治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。單個PEG是分枝狀結(jié)構(gòu)40 kDa的分子，通過上僅有的一個半胱甘酸殘基（Cys227）連接到抗體片斷的C末端。PEG化大大延長了Cimzia的血漿半衰期，只用每月注射一次。

剩下的兩個產(chǎn)品（Arcalyst 和Nplate）是二聚體融合蛋白；諾和諾德的Victoza是一個胰高血糖素樣肽1 （GLP-1）類似物，并連上了一個脂肪酸分子。GLP-1是腸促胰島素激素家族的一員，腸促胰島素激素是一類可促進胰島素生成和分泌的激素。Victoza與原分子有30個氨基酸的差別，原分子的一個賴氨酸殘基被*取代，并在剩余的賴氨酸殘基上連上了一個C16脂肪酸。這樣的變化使該激素類似物的血漿半衰期從2分鐘提高到13小時，使得2型糖尿病患者每天只用注射一次。該藥有成為重磅炸彈的潛力，因為抗糖尿病藥物市場已經(jīng)在2009年達到了230億美元。

糖基化工程

大部分治療性蛋白都有一個或多個翻譯后修飾，并且這些翻譯后修飾步驟肯定會影響生化性質(zhì)、治療效果。糖基化修飾是翻譯后修飾中zui常見的一種，40%已批準上市的治療性蛋白都與其有關(guān)。用哺乳動物細胞生產(chǎn)糖基化修飾的生物藥，除一些已經(jīng)認識到的局限外，就是受限于哺乳動物細胞無法產(chǎn)生治療上可接受的糖基化模式。

一個值得注意的趨勢就是通過糖基化工程去改造一個生物藥的糖基化，以改進一些治療屬性。早前的方法涉及下游處理（如先前提到的葡糖腦苷酯酶）或在蛋白骨架上提供一些額外的糖基化位點——例如Amgen的EPO的類似物Aranesp。在zui近的2-3年，后一項技術(shù)被應(yīng)用到其他生物藥（至少是實驗層面上）。高度糖基化的干擾素-α變異體，其血漿半衰期提高了25-50倍。高度糖基化的FSH變異體注射到雌性小鼠體內(nèi)后，促進了排卵和胚胎細胞形成。

另一種可選方案則是將預(yù)合成的低聚糖通過化學(xué)連接的方式連接到蛋白骨架上。例如，zui近報道了通過將帶有甘露糖-6-磷酸（MP-6）末端的低聚糖連接到（α-葡萄糖苷酶）蛋白骨架上促進了肌肉細胞通過細胞膜表面的MP-6受體吸收溶酶體的α-葡萄糖苷酶（用于治療Ⅱ型糖原貯積癥）。進一步的研究表明，這種修飾與Ⅱ型糖原貯積癥小鼠模型中的治療效果改善有關(guān)聯(lián)。

酵母和植物細胞中的糖基化工程也取得了進展，這兩個系統(tǒng)相對于哺乳動物細胞系統(tǒng)具有技術(shù)、經(jīng)濟優(yōu)勢，但這兩個系統(tǒng)都不適合于生產(chǎn)糖基化產(chǎn)品。糖基化蛋白在酵母中表達，總是導(dǎo)致連接上許多富含甘露糖的糖基側(cè)鏈，而缺乏降低藥物血漿半衰期的唾液酸末端。在植物細胞中表達糖蛋白則產(chǎn)生含有木糖和巖藻糖的超高糖基化產(chǎn)物，而木糖和巖藻糖基對人是具有免疫原性的。此外，糖基側(cè)鏈往往缺乏唾液酸末端，這是能負調(diào)控糖基化藥物血漿半衰期的。

酵母的糖基化工程也取得了進展，使得酵母能夠生產(chǎn)滿足治療性生物藥品的糖基化。從經(jīng)濟角度來看，Merck全資下屬子公司Glycofi在該領(lǐng)域做出了巨大貢獻：經(jīng)它們糖基化工程改造的巴斯德酵母能夠生產(chǎn)均一性的帶唾液酸末端的糖基化產(chǎn)物。這需要敲除掉4個基因（避免酵母*的糖基化）并引入14個和糖基化有關(guān)的基因。

在植物系統(tǒng)中，zui近一個重大進步是開發(fā)出了缺乏木糖和巖藻糖核心轉(zhuǎn)移酶的體系。Greenovation Biotech開發(fā)了一種糖基化工程敲除木糖和巖藻糖核心轉(zhuǎn)移酶的苔蘚（Physcomitrella patens）。這種苔蘚長在一個光合自養(yǎng)的密閉發(fā)酵體系中。培養(yǎng)基僅僅是由水，礦物質(zhì)組成的，光和二氧化碳作為能源和碳源。另外還有BiolexTherapeutics開發(fā)出了一種用RNAi干擾去除木糖和巖藻糖核心轉(zhuǎn)移酶表達的浮萍系統(tǒng)。Biolex的核心產(chǎn)品Locteron（干擾素-α 2b）在今年四月已經(jīng)宣布進入臨床2b期。

生物上游和下游處理

醫(yī)療改革，醫(yī)療預(yù)算的壓力和行業(yè)內(nèi)競爭迫使生物仿制藥生產(chǎn)企業(yè)降低生產(chǎn)成本。這些年可喜的見到了許多生產(chǎn)上游和下游的改進，例如可拋棄式系統(tǒng)和下游處理流水線的發(fā)展。

一次性可拋棄式生物反應(yīng)器的出現(xiàn)是一個重要的事件。例如通用公司的波浪式反應(yīng)器和Xcellerex公司的XRD生物反應(yīng)器等等。通用公司的袋式波浪反應(yīng)器的容量可達500L，由多層塑料制成，zui里層是生物相容性很好的乙烯醋酸乙烯酯——聚乙烯的共聚物。袋式生物反應(yīng)器由γ-射線滅菌，并通過搖動來使培養(yǎng)基混勻。Xcellerex公司的XRD生物反應(yīng)器，其袋容量可達2000L，細胞培養(yǎng)帶內(nèi)部安置有此例攪拌器來混勻培養(yǎng)基，在上游處理過程中可以封裝在不銹鋼外殼的內(nèi)部。

支持者認為，一次性生物反應(yīng)器可減少核心設(shè)備的需求、可快速建立生產(chǎn)線、減少認證步驟、減少原位清洗、并縮短生產(chǎn)周轉(zhuǎn)期。即便如此，一次性生物反應(yīng)器高昂的細胞袋價格，并須每次更換，并且由此產(chǎn)生的有害物質(zhì)處理費用是它的缺點。此外，許多生產(chǎn)工廠已經(jīng)在安裝和認證傳統(tǒng)不銹鋼生產(chǎn)系統(tǒng)投入巨資，并且一般在大規(guī)模生產(chǎn)（大于2000L）時才會使用該系統(tǒng)；因而一次性系統(tǒng)在特定情況下仍然是具有很大吸引力的。

哺乳動物細胞表達系統(tǒng)的表達量也在提高，如今，5g/L的產(chǎn)量是很平常的。并且在將來的產(chǎn)量還會隨著篩選出高表達量的哺乳動物細胞株，培養(yǎng)基優(yōu)化，延長培養(yǎng)基中的細胞壽命而進一步提高。

隨著產(chǎn)量不斷提高，大規(guī)模生產(chǎn)的瓶頸將會轉(zhuǎn)移到下游處理過程中。值得注意的是，下游處理費用占到了生產(chǎn)總成本的80%。例如，每個生產(chǎn)周期消耗的過濾細菌的濾器價格高達25000美元，一支生產(chǎn)中用的蛋白A親和層析柱的價格高達150萬美元。高昂的價格促進了該領(lǐng)域的革新，主要重點則在于下游處理的流水線化和簡便化。例如，已經(jīng)開發(fā)出了帶電荷的厚濾器，在去除細胞碎片的同時選擇性的除去一些污染物：如DNA和宿主蛋白。一些不常用的純化方法，如雙向萃取、結(jié)晶、沉淀重新進入了人們的視野。另一方面，開發(fā)一些非傳統(tǒng)的色譜材料、支持物，色譜移動床吸附和其它非傳統(tǒng)模式也取得了進展。

核酸類產(chǎn)品

從2006年起，沒有一個核酸產(chǎn)品在歐盟或美國獲批上市。*個人類基因治療試驗始于1989年。在過去20年間，共有1443起核酸治療產(chǎn)品進入臨床試驗階段，主要是在美國。核酸治療的臨床試驗主要是針對癌癥（占總數(shù)的64%），其次是針對心血管疾病，單基因突變類疾病，感染類疾病，三者各占臨床試驗總數(shù)的8%。過去20年間，超過1000起臨床試驗，而無一個人用產(chǎn)品在歐盟或美國獲批上市。

值得注意的是，獲批的幾個核酸類產(chǎn)品（DNA疫苗）都是做為獸藥應(yīng)用。輝瑞旗下Fort Dodge’s的產(chǎn)品West Nile Innovatorzui先于2005年由美國*批準上市，用于給馬接種預(yù)防西尼羅河病毒。這是一個質(zhì)粒類疫苗，攜帶有西尼羅河病毒表面抗原的基因序列。在肌肉注射過后，經(jīng)由細胞吸收，質(zhì)粒表達抗原，并觸發(fā)免疫保護。其它獲批的DNA動物疫苗包括：

Apex-IHN （DNA疫苗，表達傳染性造血組織壞死病毒的外殼糖蛋白，Novartis生產(chǎn)，2005年在加拿大獲批用于鮭魚） ；LifeTide-SW5 （針對生長激素釋放激素，VGX Animal Health生產(chǎn)，2007年在澳大利亞獲批用于預(yù)防豬胎流產(chǎn)）；犬黑色素瘤疫苗（表達人*酶的DNA疫苗，Merial生產(chǎn)，2007年在美國獲批用于治療犬惡性黑色素瘤）。

雖然許多人用的基因治療產(chǎn)品到達了臨床試驗的末期，甚至完成了臨床試驗，但是在歐盟和美國沒有一個基因治療產(chǎn)品拿到了上市許可。在2008年，Introgen Therapeutics的基因治療產(chǎn)品Advexin（用于治療頭頸部鱗狀細胞癌）雖然進入了快速審批通道，但是FDAzui后還是否決了它的上市申請。Advexin是一個以基因工程改造過的腺病毒作為載體，攜帶著一個有功能的人p53基因拷貝。同年，因為歐洲藥物管理委員會因為考慮到產(chǎn)品的質(zhì)量控制、有效性和安全性，也未批準Advexin的上市申請。

zui近，核酸類藥物的上市前景遭遇了又一個挫折：2009年12月，EMA經(jīng)過討論后發(fā)布了對Cerepro的否定意見，zui終導(dǎo)致研發(fā)公司（Ark Therapeutics）在今年四月撤銷了Cerepro的上市申請。Cerepro采用腺病毒作為載體，攜帶一個單純皰疹病毒的胸苷激酶基因。在惡性膠質(zhì)瘤手術(shù)切除后，將Cerepro用于手術(shù)部位，Cerepro可將隨后注射的藥物前體*轉(zhuǎn)化為細胞毒性產(chǎn)物，進而殺滅手術(shù)后剩余的腫瘤細胞，提高療效。EMA之所以做出負面評價，是因為Cerepro未展現(xiàn)出足夠的有效性，基于風(fēng)險-利益評估，不太可能批準其上市。

目前，歐盟正在評估一份來自Amsterdam Molecular Therapeutics的基因治療藥物Glybera的上市申請。Glybera以基因工程改造過的腺病毒作為載體，攜帶人脂蛋白脂肪酶（LPL）基因，用于治療LPL缺乏癥。

反義和RNAi類產(chǎn)品也在發(fā)展之中。幾個RNAi類產(chǎn)品都處于臨床3期，如Isis公司生產(chǎn)的Mipomersen（針對載脂蛋白B）。今年二月，Isis宣布這個降*產(chǎn)品在臨床3期試驗中達到了主要的臨床終點，但樂觀情緒隨即受到一些影響：因為發(fā)現(xiàn)一些試驗參與者的肝臟酶水平升高。

Genta公司的反義核酸產(chǎn)品Genasense仍在進行其漫長的臨床3期試驗。該藥是抑制BCL-2的產(chǎn)生，BCL-2被認為是阻礙腫瘤細胞凋亡的。該藥可在多種癌癥的標準治療方案中結(jié)合使用，其zui早是在2003年申請用于治療惡性黑色素瘤。兩年前，F(xiàn)DA要求Genta公司提供附加臨床數(shù)據(jù)，以支持其用于治療慢性淋巴細胞白血病的申請。

*個RNAi類產(chǎn)品在2004年才進入臨床試驗；去年已經(jīng)做到臨床3期的bevasiranib（對VEGF進行RNAi干擾，用于治療老年黃斑病變）遭遇失敗，這是RNAi產(chǎn)品遭遇的重大挫折。

對于反義核酸和基因治療，體內(nèi)藥物輸送仍然是本領(lǐng)域中主要的技術(shù)難點；對于siRNA治療產(chǎn)品提高其化學(xué)穩(wěn)定性是首要問題。然而，zui近在非實體瘤病人身上的一項試驗證明（人數(shù)=3），系統(tǒng)地進行siRNA給藥，抑制了一個腫瘤靶標的表達。這給RNAi治療帶來了一線曙光。

生物制藥行業(yè)遠景展望

蛋白質(zhì)治療藥物每年以7%-15%的增長率持續(xù)增長，到2013年藥物top5中可能有4個都會是蛋白類藥物。

雖然在未來幾年，很可能會有核酸類藥物獲批上市，但蛋白類（尤其是單抗類）將會是獲批上市的重點。目前，有240個單抗類產(chǎn)品、120個重組蛋白處于臨床試驗階段。生物仿制藥也將在未來幾年大批上市。除了已經(jīng)設(shè)立生物仿制藥上市法規(guī)的西方國家外，生物仿制藥在新興市場迅猛發(fā)展，比如說中國和印度。中國的生物藥市場2008年已經(jīng)達到了100億美元，印度市場也達到了20億美元。

經(jīng)過工程改造過的產(chǎn)品所占上市產(chǎn)品中的比例也將上升。傳統(tǒng)的工程改造關(guān)注蛋白骨架，現(xiàn)今則更為關(guān)注翻譯后修飾。糖基化工程的進步，可能會引導(dǎo)翻譯后修飾的潮流。今后可能會有細胞毒性優(yōu)化、糖基化工程修飾的抗體上市市場潮流。

現(xiàn)今干細胞生物學(xué)的發(fā)展預(yù)示著干細胞治療的廣闊前景，現(xiàn)今已有85個成人干細胞治療方案進入臨床試驗。將分化的體細胞誘導(dǎo)生成iPS是該領(lǐng)域開創(chuàng)性的工作，并且為細胞治療提供了廣泛的自體組織來源；并可促進細胞替代治療方案的發(fā)展，因為它沒有免疫排斥反應(yīng)。近期，科研人員還實現(xiàn)了細胞定向轉(zhuǎn)化（從一種細胞直接轉(zhuǎn)化為另一種細胞）。另外值得一提的是，近期發(fā)現(xiàn)通過表達3種細胞轉(zhuǎn)錄因子，纖維母細胞可直接轉(zhuǎn)化為神經(jīng)元。

總的來說，生物制藥行業(yè)的前景仍然是很光明的，而且現(xiàn)今不斷前進的科研和革新為生物藥的發(fā)展提供了堅實的基礎(chǔ)。（滬宇生物）

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