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貨號	CS-X3321	規(guī)格	5×105Cells/T25培養(yǎng)瓶
生長特性	貼壁	組織來源	海綿體組織

產品信息：

貨號	CS-X3321	組織來源	海綿體組織
傳代特性	可傳1-3代左右	培養(yǎng)基	含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
細胞形態(tài)	成纖維細胞樣	生長特性	貼壁
培養(yǎng)條件	氣相：空氣，95%；CO2，5%	換液頻率	每2-3天換液一次

小鼠海綿體平滑肌細胞

商品介紹：

產品名稱：小鼠海綿體平滑肌細胞
2.組織來源：海綿體組織

3.產品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

4.細胞簡介：

小鼠海綿體平滑肌細胞分離自海綿體組織；海綿體，又稱海綿體肌，是硬的平滑肌和結締組織。海綿體是一種勃起組織，外面包有堅厚的白膜，內部由結締組織和平滑肌組成海綿狀支架，其腔隙與血管相通。它主要包括海綿體內皮細胞、平滑肌細胞和成纖維細胞3種細胞成分。其中平滑肌細胞和成纖維細胞鑲嵌于海綿體細胞外基質的膠原中，在消化海綿體組織時，膠原酶的作用主要是松解海綿體內皮細胞與基膜的聯(lián)系，破壞海綿體內皮細胞間的緊密連接。因此可用膠原酶分離出海綿體平滑肌細胞。平滑肌，是非橫紋肌的肌肉組織。分布在人體動脈和靜脈血管壁、膀胱、子宮、男性和女性生殖道、消化道、呼吸道、眼睛的睫狀肌和虹膜。平滑肌細胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見細胞貼壁伸展，細胞形態(tài)大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細胞匯合，多數細胞伸展呈長梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長，高低起伏；細胞密度低時，常交織成網狀；密度高時，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細胞生長較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學特征和生長特點。

5.方法簡介：

公司實驗室分離的小鼠海綿體平滑肌細胞采用膠原酶消化法結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質量檢測：

公司實驗室分離的小鼠海綿體平滑肌細胞經α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率每2-3天換液一次

生長特性貼壁

細胞形態(tài) 成纖維細胞樣

傳代特性可傳1-3代左右

消化液 0.25%yi蛋白酶

培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5%

細胞保存方法：

（一）細胞凍存

1. 配制含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的凍存培養(yǎng)液；

2. 取對數生長期的細胞，去除舊培養(yǎng)液，用PBS清洗。

3. 去除PBS，加入適量（覆蓋培養(yǎng)皿表面）把單層生長的細胞消化下來；

4. 離心1000rpm，5min；

5. 去除，加入適量配制好的凍存培養(yǎng)液，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，計數，調節(jié)凍存液中細胞的最終密度為5×106/ml～1×107/ml；

6. 將細胞分裝入凍存管中，每管1～1.5 ml；

7. 在凍存管上標明細胞的名稱，凍存時間及操作者；

8. 凍存：標準的凍存程序為降溫速率-1～-2℃/ min；當溫度達-25℃以下時，可增至-5℃～-10℃/min；到-100℃時，則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細胞的凍存管放入-20℃冰箱2h ，然后放入-70℃冰箱中過夜，取出凍存管，移入液氮容器內。

小鼠海綿體平滑肌細胞

注意事項：

1）、欲冷凍保存之細胞應在生長良好且存活率高之狀態(tài)，約為80～90%致密度。冷凍前檢測細胞是否仍保有其性質，應在冷凍保存前一至二日測試是否有抗體之產生。

2）、細胞在液氮中可長期凍存無，而不會影響細胞活力;在-70度可保存數月。

3）、注意冷凍保護劑之品質。DMSO應為試劑級等級，無菌且無色(以0. 22micron FGLP Telflon過濾或是直接購買無菌產品，如Sigma D-2650)，以5～10 ml小體積分裝，4 ℃避光保存，勿作多次解凍。Glycerol亦應為試劑級等級，以高壓蒸汽滅菌后避光保存。在開啟后一年內使用，因長期儲存后對細胞會有毒性。本方法中先制備雙倍凍存液，可避免DMSO直接加入時釋放的熱量對細胞的損傷。緩慢逐滴加入細胞懸液是使細胞逐步適應高滲，可降低細胞受損。DMSO可能引起部分白血病細胞株的分化，可換用10%甘油凍存。

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操作步驟：

1）、冷凍前24-48小時更換半量或全量培養(yǎng)基，使細胞處于指數生長期。

2）、配制冷凍保存溶液(使用前配制)：另取一離心管，加入培養(yǎng)基、血清，逐滴加入二甲基亞砜 (DMSO)至20%濃度，即制成雙倍的凍存液，置于室溫下待用。

3）、離心收集培養(yǎng)之細胞，用加血清的培養(yǎng)基重懸起細胞，取少量細胞懸浮液(約0. 1 ml)計數細胞濃度及凍前存活率。

4）、取與細胞懸液等量的凍存液，緩慢逐滴加入細胞懸液，并晃動試管，制成細胞凍存懸液(DMSO后濃度為5～10%)，使細胞濃度為1～5×106cells/ ml，混合均勻，分裝于已標示之冷凍保存管中，1～2 ml/vial，并取少量細胞懸浮液作污染檢測。嚴密封口后，注明細胞名稱、代數、日期。然后進行凍存。