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當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>科研細(xì)胞>>原代細(xì)胞>> 小鼠浦肯野細(xì)胞
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更新時(shí)間:2024-07-26 15:58:04瀏覽次數(shù):395次
聯(lián)系我時(shí),請(qǐng)告知來自 環(huán)保在線規(guī)格 | 5×105Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 組織來源 | 小腦組織 |
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貨號(hào) | CS-X3406 | 細(xì)胞形態(tài) | 神經(jīng)元細(xì)胞樣 |
細(xì)胞保存方法:
(一)細(xì)胞凍存
1. 配制含10%DMSO或甘油、10~20%小牛血清的凍存培養(yǎng)液;
2. 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞,去除舊培養(yǎng)液,用PBS清洗。
3. 去除PBS,加入適量(覆蓋培養(yǎng)皿表面)把單層生長(zhǎng)的細(xì)胞消化下來;
4. 離心1000rpm,5min;
5. 去除,加入適量配制好的凍存培養(yǎng)液,用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻,計(jì)數(shù),調(diào)節(jié)凍存液中細(xì)胞的最終密度為5×106/ml~1×107/ml;
6. 將細(xì)胞分裝入凍存管中,每管1~1.5 ml;
7. 在凍存管上標(biāo)明細(xì)胞的名稱,凍存時(shí)間及操作者;
8. 凍存:標(biāo)準(zhǔn)的凍存程序?yàn)榻禍厮俾?1~-2℃/ min;當(dāng)溫度達(dá)-25℃以下時(shí),可增至-5℃~-10℃/min;到-100℃時(shí),則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細(xì)胞的凍存管放入-20℃冰箱2h ,然后放入-70℃冰箱中過夜,取出凍存管,移入液氮容器內(nèi)。
產(chǎn)品信息:
貨號(hào) | CS-X3406 | 組織來源 | 小腦組織 |
傳代特性 | 不增殖;不傳代 | 培養(yǎng)基 | 含脂質(zhì)濃縮液、BSA、Monothioglycerol、Transferrin、Penicillin、Streptomycin等 |
細(xì)胞形態(tài) | 神經(jīng)元細(xì)胞樣 | 生長(zhǎng)特性 | 貼壁 |
培養(yǎng)條件 | 換液頻率 | 每2-3天換液一次 |
商品介紹:
產(chǎn)品名稱:小鼠浦肯野細(xì)胞 3.產(chǎn)品規(guī)格:5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡(jiǎn)介: 小鼠浦肯野細(xì)胞分離自小腦皮質(zhì)組織;小腦的表面被覆著一層灰質(zhì),叫小腦皮質(zhì),小腦皮質(zhì)分為3層,從表及里分別為分子層、浦肯野細(xì)胞層和顆粒細(xì)胞層。皮質(zhì)里含有星狀細(xì)胞、籃狀細(xì)胞、浦肯野細(xì)胞、高爾基細(xì)胞和顆粒細(xì)胞等5種神經(jīng)元。浦肯野細(xì)胞發(fā)出的軸突組成小腦皮質(zhì)的傳出纖維,終止于小腦白質(zhì)內(nèi)的神經(jīng)核。浦肯野細(xì)胞(Purkinje cell)是從小腦皮質(zhì)發(fā)出的能夠傳出沖動(dòng)的神經(jīng)元。人的小腦皮質(zhì)約有1500萬個(gè)浦肯野細(xì)胞。浦肯野細(xì)胞還廣泛分布于心室。顯著的電生理特點(diǎn)是傳導(dǎo)性強(qiáng),傳導(dǎo)速度快,可達(dá)4000mm/s。屬快反應(yīng)自律型細(xì)胞,具有舒張期自動(dòng)除極化的性能,因而有自律性,但自律性強(qiáng)度明顯低于竇房結(jié)P細(xì)胞。這類細(xì)胞常常平行排列,細(xì)胞內(nèi)電阻低,只有心室細(xì)胞的1/3。小腦:浦肯野細(xì)胞是小腦皮質(zhì)中大的神經(jīng)元,細(xì)胞體呈梨形,頂端發(fā)出2~3條粗大的主樹突,向外伸入分子層。主樹突沿途分支繁茂,形如展開的、扁薄的扇形,鋪展在與小腦葉片長(zhǎng)軸垂直的平面上。樹突分支上有大量的樹突棘,與傳入纖維構(gòu)成廣泛的突觸聯(lián)系,接受傳入小腦的全部信息。軸突由細(xì)胞底部(與主樹突相對(duì)方向)發(fā)出,細(xì)長(zhǎng),離開胞體不遠(yuǎn)便形成有髓神經(jīng)纖維,向內(nèi)經(jīng)顆粒層離開皮質(zhì)進(jìn)入白質(zhì),組成小腦皮質(zhì)的傳出纖維,終止于小腦內(nèi)部的神經(jīng)核團(tuán)。一個(gè)浦肯野細(xì)胞的軸突約形成500個(gè)終末膨大,約與小腦深部核團(tuán)的35個(gè)神經(jīng)元形成突觸。心臟浦肯野細(xì)胞常常平行排列,幾個(gè)細(xì)胞互相以漿膜連接排成一個(gè)小束,小束外包繞著基底膜。細(xì)胞內(nèi)含肌原纖維很少,胞漿區(qū)內(nèi)充滿糖原顆粒、線粒體和肌漿網(wǎng),細(xì)胞內(nèi)電阻低,只有心室細(xì)胞的1/3。浦肯野細(xì)胞內(nèi)無橫管系統(tǒng),但膜電容比收縮細(xì)胞大,可能是由于其閏盤結(jié)構(gòu)廣泛而復(fù)雜,提供了較大的表面積的緣故。浦肯野細(xì)胞閏盤的主要成分是縫隙連接,粒著膜占的比例很少,這些可能是構(gòu)成浦肯野細(xì)胞傳導(dǎo)快的形態(tài)學(xué)基礎(chǔ)。 5.方法簡(jiǎn)介: 公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠浦肯野細(xì)胞采用yi蛋白酶消化法結(jié)合神經(jīng)元專用培養(yǎng)基、化學(xué)試劑抑制法篩選制備而來,細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶 6.質(zhì)量檢測(cè): 公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠浦肯野細(xì)胞經(jīng)Neph3免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息: 包被條件 PLL(0.1mg/ml) 培養(yǎng)基 含脂質(zhì)濃縮液、BSA、Monothioglycerol、Transferrin、Penicillin、Streptomycin等 換液頻率 每2-3天換液一次 生長(zhǎng)特性 貼壁 細(xì)胞形態(tài) 神經(jīng)元細(xì)胞樣 傳代特性 不增殖;不傳代 消化液 0.25%yi蛋白酶 培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5% |
操作步驟:
1)、冷凍前24-48小時(shí)更換半量或全量培養(yǎng)基,使細(xì)胞處于指數(shù)生長(zhǎng)期。
2)、配制冷凍保存溶液(使用前配制):另取一離心管,加入培養(yǎng)基、血清,逐滴加入二甲基亞砜 (DMSO)至20%濃度,即制成雙倍的凍存液,置于室溫下待用。
3)、離心收集培養(yǎng)之細(xì)胞,用加血清的培養(yǎng)基重懸起細(xì)胞,取少量細(xì)胞懸浮液(約0. 1 ml)計(jì)數(shù)細(xì)胞濃度及凍前存活率。
4)、取與細(xì)胞懸液等量的凍存液,緩慢逐滴加入細(xì)胞懸液,并晃動(dòng)試管,制成細(xì)胞凍存懸液(DMSO后濃度為5~10%),使細(xì)胞濃度為1~5×106cells/ ml,混合均勻,分裝于已標(biāo)示之冷凍保存管中,1~2 ml/vial,并取少量細(xì)胞懸浮液作污染檢測(cè)。嚴(yán)密封口后,注明細(xì)胞名稱、代數(shù)、日期。然后進(jìn)行凍存。
注意事項(xiàng):
1)、欲冷凍保存之細(xì)胞應(yīng)在生長(zhǎng)良好且存活率高之狀態(tài),約為80~90%致密度。冷凍前檢測(cè)細(xì)胞是否仍保有其性質(zhì),應(yīng)在冷凍保存前一至二日測(cè)試是否有抗體之產(chǎn)生。
2)、細(xì)胞在液氮中可長(zhǎng)期凍存無,而不會(huì)影響細(xì)胞活力;在-70度可保存數(shù)月。
3)、注意冷凍保護(hù)劑之品質(zhì)。DMSO應(yīng)為試劑級(jí)等級(jí),無菌且無色(以0. 22micron FGLP Telflon過濾或是直接購(gòu)買無菌產(chǎn)品,如Sigma D-2650),以5~10 ml小體積分裝,4 ℃避光保存,勿作多次解凍。Glycerol亦應(yīng)為試劑級(jí)等級(jí),以高壓蒸汽滅菌后避光保存。在開啟后一年內(nèi)使用,因長(zhǎng)期儲(chǔ)存后對(duì)細(xì)胞會(huì)有毒性。本方法中先制備雙倍凍存液,可避免DMSO直接加入時(shí)釋放的熱量對(duì)細(xì)胞的損傷。緩慢逐滴加入細(xì)胞懸液是使細(xì)胞逐步適應(yīng)高滲,可降低細(xì)胞受損。DMSO可能引起部分白血病細(xì)胞株的分化,可換用10%甘油凍存。
公司正在出售的產(chǎn)品:
A172 (人膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞) | 人補(bǔ)體蛋白5(C5)檢測(cè)試劑盒 |
人乳腺癌血管周細(xì)胞 | 小鼠細(xì)胞間粘附分子1(ICAM-1/CD54)檢測(cè)試劑盒 |
人乳腺癌組織源細(xì)胞 | 人β乳糖蛋白抗體IgG 試劑盒ELISA |
人乳腺成纖維細(xì)胞 | 人白介su12(IL-12/P40)試劑盒 ELISA |
人乳腺上皮細(xì)胞 | 鴿毛滴蟲PCR試劑盒 |
人軟骨細(xì)胞 | 腸侵襲性大腸桿菌PCR檢測(cè)試劑盒 |
人神經(jīng)少突膠質(zhì)細(xì)胞 | 人溶菌mei(hLYZ)轉(zhuǎn)基因成分核suan檢測(cè)試劑盒 |
人神經(jīng)小膠質(zhì)細(xì)胞 | 牛流行熱病毒PCR檢測(cè)試劑盒 |
人神經(jīng)星形膠質(zhì)細(xì)胞 | 綿羊鞭蟲PCR試劑盒 |
人腎癌組織源細(xì)胞 | 牛支原體PCR試劑盒 |
人腎成纖維細(xì)胞 | 牛腎盂腎炎棒桿菌PCR檢測(cè)試劑盒 |
人腎動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞 | 滅鮭氣單胞菌PCR試劑盒 |
人腎動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞 | 小鼠浦肯野細(xì)胞綿羊痘病毒PCR試劑盒 |
人腎皮質(zhì)上皮細(xì)胞 | 牛丘疹性口炎病毒PCR檢測(cè)試劑盒 |
人腎實(shí)質(zhì)細(xì)胞 | 豬瘟/豬藍(lán)耳病病毒病毒通用型/豬圓環(huán)病毒型/豬偽狂犬野毒株(CSFV/PRRSV-U/PCV-/PRV-gE)核suan檢測(cè)試劑盒 |
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