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規(guī)格	5×105Cells/T25培養(yǎng)瓶	組織來源	眼角膜組織
貨號	CS-X3103	細(xì)胞形態(tài)	內(nèi)皮細(xì)胞樣

產(chǎn)品信息：

貨號	CS-X3103	組織來源	眼角膜組織
傳代特性	可傳2-3代	培養(yǎng)基	含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
細(xì)胞形態(tài)	內(nèi)皮細(xì)胞樣	生長特性	貼壁
培養(yǎng)條件		換液頻率	每2-3天換液一次

人角膜內(nèi)皮細(xì)胞

商品介紹：

產(chǎn)品名稱：人角膜內(nèi)皮細(xì)胞
2.組織來源：眼角膜組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

4.細(xì)胞簡介：

人角膜內(nèi)皮細(xì)胞分離自眼角膜組織；角膜位于眼球前壁的一層透明膜，約占纖維膜的前1/6，從后面看角膜呈正圓形，從前面看為橫橢圓形。角膜厚度各部分不盡相同，中央部薄。角膜有十分敏感的神經(jīng)末梢，如有外物接觸角膜，眼瞼便會不由自主地合上以保護(hù)眼睛。為了保持透明，角膜并沒有血管，透過外界空氣、淚液及房水獲取養(yǎng)份及氧氣。角膜分為五層，由前向后依次為：上皮細(xì)胞層、前彈力層、基質(zhì)層、后彈力層、內(nèi)皮細(xì)胞層。角膜的高度透明性和光學(xué)性是正常發(fā)揮生理功能的必要條件之一，而角膜內(nèi)皮細(xì)胞（CEC）在維持角膜的正常生理功能方面起重要作用。角膜內(nèi)皮細(xì)胞是角膜內(nèi)層的單層細(xì)胞，構(gòu)成了后彈力層和房水之間的物理屏障，通過離子“泵"功能調(diào)節(jié)角膜中離子濃度和水分，維持角膜的半脫水狀態(tài)，保證角膜的正常厚度和透明度。一旦角膜內(nèi)皮細(xì)胞功能出現(xiàn)紊亂，常導(dǎo)致角膜水腫而使角膜部分甚至失去透明性。角膜內(nèi)皮細(xì)胞主要功能有：①角膜是的無血管的組織，具有透明的特性和合成許多蛋白的功能；②角膜內(nèi)皮細(xì)胞對角膜透明性有重要作用；③角膜內(nèi)皮細(xì)胞通過Na+-K+-ATP酶活性，維持角膜和房水內(nèi)Na+梯度，防止水分滲入角膜內(nèi)，維持角膜實(shí)質(zhì)層相對脫水狀態(tài)，維持透明性。

5.方法簡介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的人角膜內(nèi)皮細(xì)胞采用混合膠原酶消化結(jié)合內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質(zhì)量檢測：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的人角膜內(nèi)皮細(xì)胞經(jīng)NSE（神經(jīng)元特異性烯醇化酶）免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息：

包被條件 PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率每2-3天換液一次

生長特性貼壁

細(xì)胞形態(tài) 內(nèi)皮細(xì)胞樣

傳代特性可傳2-3代

消化液 0.25%yi蛋白酶

培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5%

細(xì)胞保存方法：

（一）細(xì)胞凍存

1. 配制含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的凍存培養(yǎng)液；

2. 取對數(shù)生長期的細(xì)胞，去除舊培養(yǎng)液，用PBS清洗。

3. 去除PBS，加入適量（覆蓋培養(yǎng)皿表面）把單層生長的細(xì)胞消化下來；

4. 離心1000rpm，5min；

5. 去除，加入適量配制好的凍存培養(yǎng)液，用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻，計(jì)數(shù)，調(diào)節(jié)凍存液中細(xì)胞的最終密度為5×106/ml～1×107/ml；

6. 將細(xì)胞分裝入凍存管中，每管1～1.5 ml；

7. 在凍存管上標(biāo)明細(xì)胞的名稱，凍存時間及操作者；

8. 凍存：標(biāo)準(zhǔn)的凍存程序?yàn)榻禍厮俾?1～-2℃/ min；當(dāng)溫度達(dá)-25℃以下時，可增至-5℃～-10℃/min；到-100℃時，則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細(xì)胞的凍存管放入-20℃冰箱2h ，然后放入-70℃冰箱中過夜，取出凍存管，移入液氮容器內(nèi)。

人角膜內(nèi)皮細(xì)胞

注意事項(xiàng)：

1）、欲冷凍保存之細(xì)胞應(yīng)在生長良好且存活率高之狀態(tài)，約為80～90%致密度。冷凍前檢測細(xì)胞是否仍保有其性質(zhì)，應(yīng)在冷凍保存前一至二日測試是否有抗體之產(chǎn)生。

2）、細(xì)胞在液氮中可長期凍存無，而不會影響細(xì)胞活力;在-70度可保存數(shù)月。

3）、注意冷凍保護(hù)劑之品質(zhì)。DMSO應(yīng)為試劑級等級，無菌且無色(以0. 22micron FGLP Telflon過濾或是直接購買無菌產(chǎn)品，如Sigma D-2650)，以5～10 ml小體積分裝，4 ℃避光保存，勿作多次解凍。Glycerol亦應(yīng)為試劑級等級，以高壓蒸汽滅菌后避光保存。在開啟后一年內(nèi)使用，因長期儲存后對細(xì)胞會有毒性。本方法中先制備雙倍凍存液，可避免DMSO直接加入時釋放的熱量對細(xì)胞的損傷。緩慢逐滴加入細(xì)胞懸液是使細(xì)胞逐步適應(yīng)高滲，可降低細(xì)胞受損。DMSO可能引起部分白血病細(xì)胞株的分化，可換用10%甘油凍存。

公司正在出售的產(chǎn)品：

小鼠角膜基質(zhì)細(xì)胞	人基質(zhì)金屬蛋白mei9/明膠meiB(MMP-9/Gelatinase B)ELISA檢測試劑盒
人胎盤絨毛膜細(xì)胞	人甲基化mei(Methylase)檢測試劑盒
人微血管周細(xì)胞	人高香草suan(HVA)檢測試劑盒
人小氣道上皮細(xì)胞	人Ephrin-B2(EFNB2)檢測試劑盒
人牙周膜干細(xì)胞	傷PCR試劑盒
人支氣管平滑肌細(xì)胞	合歡花染料法PCR鑒定試劑盒
人子宮成纖維細(xì)胞	人Cosmc基因PCR檢測試劑盒
兔肺成纖維細(xì)胞	皺紋毛圓線蟲PCR檢測試劑盒
兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞	拉蒂諾病毒RT-PCR試劑盒
兔角膜內(nèi)皮細(xì)胞	人副流感病毒1型RT-PCR試劑盒
兔氣管上皮細(xì)胞	人鼻病毒通用PCR檢測試劑盒
兔子宮成纖維細(xì)胞	類志賀鄰單胞菌PCR檢測試劑盒
兔羊膜間質(zhì)細(xì)胞	人角膜內(nèi)皮細(xì)胞藍(lán)氏賈第鞭毛蟲PCR檢測試劑盒
小鼠表皮角質(zhì)形成細(xì)胞	人E-選擇suSR基因多態(tài)性檢測試劑盒(PCR-RLFP)
小鼠腸系膜平滑肌細(xì)胞	人生殖道支原體通用型PCR檢測試劑盒

操作步驟：

1）、冷凍前24-48小時更換半量或全量培養(yǎng)基，使細(xì)胞處于指數(shù)生長期。

2）、配制冷凍保存溶液(使用前配制)：另取一離心管，加入培養(yǎng)基、血清，逐滴加入二甲基亞砜 (DMSO)至20%濃度，即制成雙倍的凍存液，置于室溫下待用。

3）、離心收集培養(yǎng)之細(xì)胞，用加血清的培養(yǎng)基重懸起細(xì)胞，取少量細(xì)胞懸浮液(約0. 1 ml)計(jì)數(shù)細(xì)胞濃度及凍前存活率。

4）、取與細(xì)胞懸液等量的凍存液，緩慢逐滴加入細(xì)胞懸液，并晃動試管，制成細(xì)胞凍存懸液(DMSO后濃度為5～10%)，使細(xì)胞濃度為1～5×106cells/ ml，混合均勻，分裝于已標(biāo)示之冷凍保存管中，1～2 ml/vial，并取少量細(xì)胞懸浮液作污染檢測。嚴(yán)密封口后，注明細(xì)胞名稱、代數(shù)、日期。然后進(jìn)行凍存。