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規(guī)格	5×105Cells/T25培養(yǎng)瓶	組織來源	肺動脈組織
貨號	CS-X2727	細胞形態(tài)	成纖維細胞樣

細胞保存方法：

（一）細胞凍存

1. 配制含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的凍存培養(yǎng)液；

2. 取對數(shù)生長期的細胞，去除舊培養(yǎng)液，用PBS清洗。

3. 去除PBS，加入適量（覆蓋培養(yǎng)皿表面）把單層生長的細胞消化下來；

4. 離心1000rpm，5min；

5. 去除，加入適量配制好的凍存培養(yǎng)液，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，計數(shù)，調節(jié)凍存液中細胞的最終密度為5×106/ml～1×107/ml；

6. 將細胞分裝入凍存管中，每管1～1.5 ml；

7. 在凍存管上標明細胞的名稱，凍存時間及操作者；

8. 凍存：標準的凍存程序為降溫速率-1～-2℃/ min；當溫度達-25℃以下時，可增至-5℃～-10℃/min；到-100℃時，則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細胞的凍存管放入-20℃冰箱2h ，然后放入-70℃冰箱中過夜，取出凍存管，移入液氮容器內(nèi)。

產(chǎn)品信息：

貨號	CS-X2727	組織來源	肺動脈組織
傳代特性	可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)	培養(yǎng)基	含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
細胞形態(tài)	成纖維細胞樣	生長特性	貼壁
培養(yǎng)條件	氣相：空氣，95%；CO2，5%	換液頻率	每2-3天換液一次

商品介紹：

產(chǎn)品名稱：大鼠肺大動脈平滑肌細胞
2.組織來源：肺動脈組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

4.細胞簡介：

大鼠肺大動脈平滑肌細胞分離自肺大動脈組織；肺大動脈亦稱肺動脈干。在呼吸空氣的脊椎動物中，把靜脈血由心臟導向肺臟的動脈。肺大動脈起于右心室，在主動脈之前向左上后方斜行，在主動脈弓下方分為左、右肺動脈，經(jīng)肺門入肺。肺動脈干位于心包內(nèi)，為一粗短的動脈干。起自右心室，在升主動脈前方向左后上方斜行，至主動脈弓下方分為左、右肺動脈。左肺動脈較短，在左主支氣管前方橫行，分二支進入左肺上、下葉。右肺動脈較長而粗，經(jīng)升主動脈和上腔靜脈后方向右橫行，至右肺門處分為三支進入右肺上、中、下葉。肺大動脈平滑肌細胞是肺血管的重要結構細胞之一，在調控肺血管的收縮和舒張功能中有重要作用。肺大動脈平滑肌細胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見細胞貼壁伸展，細胞形態(tài)大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細胞匯合，多數(shù)細胞伸展呈長梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長，高低起伏；細胞密度低時，常交織成網(wǎng)狀；密度高時，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細胞生長較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學特征和生長特點。肺大動脈平滑肌細胞的異常是肺動脈高壓發(fā)生發(fā)展的重要病理學特征，其凋亡和增殖失衡是肺血管重塑的關鍵。研究表明，急性和慢性缺氧均可導致肺動脈高壓，即缺氧性肺動脈高壓，推斷缺氧可能是通過促進肺大動脈平滑肌細胞的增殖而參與缺氧性肺動脈高壓的發(fā)生發(fā)展。肺大動脈平滑肌細胞主要功能：①細胞表面表達介質（ICAM-1和VCAM-1）參與血管壁炎癥反應；②是多數(shù)重要動脈疾病的靶細胞。肺大動脈平滑肌細胞與主要病生理變化：①平滑肌增生易致肺動脈高壓；②先天性肺動脈狹窄；③肺動脈栓塞。

5.方法簡介：

公司實驗室分離的大鼠肺大動脈平滑肌細胞采用yi蛋白酶-膠原酶聯(lián)合消化法結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質量檢測：

公司實驗室分離的大鼠肺大動脈平滑肌細胞經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率每2-3天換液一次

生長特性貼壁

細胞形態(tài) 成纖維細胞樣

傳代特性可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)

消化液 0.25%yi蛋白酶

培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5%

大鼠肺大動脈平滑肌細胞

操作步驟：

1）、冷凍前24-48小時更換半量或全量培養(yǎng)基，使細胞處于指數(shù)生長期。

2）、配制冷凍保存溶液(使用前配制)：另取一離心管，加入培養(yǎng)基、血清，逐滴加入二甲基亞砜 (DMSO)至20%濃度，即制成雙倍的凍存液，置于室溫下待用。

3）、離心收集培養(yǎng)之細胞，用加血清的培養(yǎng)基重懸起細胞，取少量細胞懸浮液(約0. 1 ml)計數(shù)細胞濃度及凍前存活率。

4）、取與細胞懸液等量的凍存液，緩慢逐滴加入細胞懸液，并晃動試管，制成細胞凍存懸液(DMSO后濃度為5～10%)，使細胞濃度為1～5×106cells/ ml，混合均勻，分裝于已標示之冷凍保存管中，1～2 ml/vial，并取少量細胞懸浮液作污染檢測。嚴密封口后，注明細胞名稱、代數(shù)、日期。然后進行凍存。

注意事項：

1）、欲冷凍保存之細胞應在生長良好且存活率高之狀態(tài)，約為80～90%致密度。冷凍前檢測細胞是否仍保有其性質，應在冷凍保存前一至二日測試是否有抗體之產(chǎn)生。

2）、細胞在液氮中可長期凍存無，而不會影響細胞活力;在-70度可保存數(shù)月。

3）、注意冷凍保護劑之品質。DMSO應為試劑級等級，無菌且無色(以0. 22micron FGLP Telflon過濾或是直接購買無菌產(chǎn)品，如Sigma D-2650)，以5～10 ml小體積分裝，4 ℃避光保存，勿作多次解凍。Glycerol亦應為試劑級等級，以高壓蒸汽滅菌后避光保存。在開啟后一年內(nèi)使用，因長期儲存后對細胞會有毒性。本方法中先制備雙倍凍存液，可避免DMSO直接加入時釋放的熱量對細胞的損傷。緩慢逐滴加入細胞懸液是使細胞逐步適應高滲，可降低細胞受損。DMSO可能引起部分白血病細胞株的分化，可換用10%甘油凍存。

公司正在出售的產(chǎn)品：

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MuM-2C (人侵襲性脈絡膜黑色素瘤細胞)	有輪瑞氏絳蟲PCR試劑盒
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NCI-H1975 (人肺腺癌細胞)	鯉春病毒血癥病毒PCR檢測試劑盒
NCI-H2347 (人肺癌細胞)	腦粘體蟲PCR檢測試劑盒
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PC-61 (小鼠雜交瘤細胞CD25)	通用PCR試劑盒
PUMC-HUVEC-T1(SV40T轉化人臍靜脈內(nèi)皮細胞)	變異鏈球菌PCR檢測試劑盒