大鼠促腎上皮質激素釋放激素(CRH)ELISA試劑盒實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠促腎上皮質激素釋放激素(CRH)泡素(FSH)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入大鼠促腎上皮質激素釋放激素(CRH),再與 HRP標記的大鼠促腎上皮質激素釋放激素(CRH)抗體,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗。用純化的大鼠促卵滌后加底物 TMB顯色。TMB在 HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠促腎上皮質激素釋放激素(CRH)呈正相關。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中大鼠促腎上皮質激素釋放激素(CRH)濃度。
標本要求
1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,因 NaN3抑制辣根過(HRP)活性。
大鼠促腎上皮質激素釋放激素(CRH)ELISA試劑盒操作步驟
1.標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
釋。
2.加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50ml,待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40ml,然后再加待測樣品 10ml(樣品zui終稀釋度為 5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
大鼠促腎上皮質激素釋放激素(CRH)ELISA試劑盒注意事項
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有析出,稀釋時可在浴中加溫助溶,洗滌時不影響
3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在 5分鐘內,如標本數量多,*使用排槍加樣。
4.請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本 OD值大于標準品孔*孔的 OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(×n×5)。
5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉以避免交叉污染。
6.底物請避光保存。
7.嚴格按照說明書的操作進行試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準。
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9.大鼠促腎上皮質激素釋放激素(CRH)ELISA試劑盒本試劑不同批號組分不得混用。