質(zhì)粒提取原理及常見問題解析

質(zhì)粒是真核細胞細胞核外或原核生物擬核區(qū)外能夠進行自主復(fù)制的遺傳單位，包括真核生物的細胞器（主要指線粒體和葉綠體）中和細菌細胞擬核區(qū)以外的環(huán)狀脫氧核糖核酸（DNA）分子。現(xiàn)在習慣上用來專指細菌（大腸桿菌）、酵母菌和放線菌等生物中細胞核或擬核中的DNA以外的DNA分子。在基因工程中質(zhì)粒常被用做基因的載體（Vector）。質(zhì)粒上常有抗生素的抗性基因，例如，四環(huán)素抗性基因或*抗性基因等。有些質(zhì)粒稱為附加體（episome），這類質(zhì)粒能夠整合進細菌的染色體，也能從整合位置上切離下來成為游離于染色體外的DNA分子。質(zhì)粒在宿主細胞體內(nèi)外都可復(fù)制。
目前，已發(fā)現(xiàn)有質(zhì)粒的細菌有幾百種，已知的絕大多數(shù)的細菌質(zhì)粒都是共價閉合環(huán)狀DN分子（簡稱cccDNA）。細菌質(zhì)粒的相對分子質(zhì)量一般較小，約為細菌染色體的0.5%～3%。根據(jù)相對分子質(zhì)量的大小，大致上可以把質(zhì)粒分成大小兩類：較大一類的相對分子質(zhì)量是40×106以上，較小一類的相對分子質(zhì)量是10×106以下（少數(shù)質(zhì)粒的相對分子質(zhì)量介于兩者之間）。每個細胞中的質(zhì)粒數(shù)主要決定于質(zhì)粒本身的復(fù)制特性。按照復(fù)制性質(zhì)，可以把質(zhì)粒分為兩類：一
類是嚴緊型質(zhì)粒，當細胞染色體復(fù)制一次時，質(zhì)粒也復(fù)制一次，每個細胞內(nèi)只有1～2個質(zhì)粒；另一類是松弛型質(zhì)粒，當染色體復(fù)制停止后仍然能繼續(xù)復(fù)制，每一個細胞內(nèi)一般有20個左右質(zhì)粒。這些質(zhì)粒的復(fù)制是在寄主細胞的松弛控制之下的，每個細胞中含有10-200份拷貝，如果用一定的藥物處理抑制寄主蛋白質(zhì)的合成還會使質(zhì)?？截悢?shù)增至幾千份。