獲得穩(wěn)定的雜交瘤細(xì)胞系后，即可根據(jù)需要大量生產(chǎn)單抗，以用于不同目的。

一、單抗的大規(guī)模制備

    目前大量制備單抗的方法主要有兩大系統(tǒng)，一是動物體內(nèi)生產(chǎn)法，這是國內(nèi)外實驗室所廣泛采用；另一是體外培養(yǎng)法。

1、動物體內(nèi)生產(chǎn)單抗的方法

    迄今為止，通常情況下均采用動物體內(nèi)生產(chǎn)單抗的方法，鑒于絕大多數(shù)動物用雜交瘤均由BALB/c小鼠的骨髓瘤細(xì)胞與同品系的脾細(xì)胞融合而得，因此使用的動物當(dāng)然BALB/c小鼠。本方法即將雜交瘤細(xì)胞接種于小鼠腹腔內(nèi)，在小鼠腹腔內(nèi)生長雜交瘤，并產(chǎn)生腹水，因而可得到大量的腹水單抗且抗體濃度很高?？梢娫摲ú僮骱啽恪⒔?jīng)濟(jì)，不過，腹水中?；煊行∈蟮母鞣N雜蛋白（包括Ig），因此在很多情況下要提純后才能使用，而且還有污染動物病毒的危險，故而用SPF級小鼠。

（1）材料：

a. 成年BALB/c小鼠。

b. 降植烷（Pristane）或液體石蠟。

c. 處于對數(shù)生長期的雜交瘤細(xì)胞。

（2）方法：

a. 腹腔接種降植烷或液體石蠟，每只小鼠0.3-0.5ml。

b. 7-10天后腹腔接種用PBS或無血清培養(yǎng)基稀釋的雜交瘤細(xì)胞，每只小鼠5×105/0.2ml。

c. 間隔5天后，每天觀察小鼠腹水產(chǎn)生情況，如腹部明顯膨大，以手觸摸時，皮膚有緊張感，即可用16號針頭采集腹水，一般可連續(xù)采2-3次，通常每只小鼠可采 5-10ml腹水；

d. 將腹水離心（2000r/min 5分鐘），除去細(xì)胞成分和其他的沉淀物，收集上清，測定抗體效價，分裝，-70℃凍存?zhèn)溆?，或凍干保存?/p>

二、體外培養(yǎng)生產(chǎn)單抗的方法

    總體上講，雜交瘤細(xì)胞系并不是嚴(yán)格的貼壁依賴細(xì)胞（anchorage dependent cell，ADC），因此既可以進(jìn)行單層細(xì)胞培養(yǎng)，又可以進(jìn)行懸浮培養(yǎng)。雜交瘤細(xì)胞的單層細(xì)胞培養(yǎng)法是各個實驗室zui常用的手段，即將雜交瘤細(xì)胞加入培養(yǎng)瓶中，以含10-15%小牛血清的培養(yǎng)基培養(yǎng)，細(xì)胞濃度以1×106-2×106/ml為佳，然后收集培養(yǎng)上清，其中單抗含量約10-50ug/ml。顯然，這種方法制備的單抗量極為有限，無疑是不適用于單抗的大規(guī)模生產(chǎn)。要想在體外大量制備單抗，就必須進(jìn)行雜交瘤細(xì)胞的大量（高密度）培養(yǎng)。單位體積內(nèi)細(xì)胞數(shù)量越多，細(xì)胞存活時間越長，單抗的濃度就越高，產(chǎn)量就越大。