(一)試驗(yàn)原理

    細(xì)胞被制成分散的懸液后，接種到底物上，能貼壁生長(zhǎng)，形成集落。成集落的細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)是檢驗(yàn)培養(yǎng)細(xì)胞增殖情況的可靠指標(biāo)之一，一般認(rèn)為該方法比生長(zhǎng)曲線、分裂指數(shù)測(cè)定方法的準(zhǔn)確性高。

(二)材料

1．待檢材料(藥物)。

2．細(xì)胞培養(yǎng)成層的貼壁細(xì)胞(如HeLa細(xì)胞等)。

3.試劑1640培養(yǎng)基(含10％小牛血清)、o．25％*、甲醇、吉姆薩染液。

4.器材CO2培養(yǎng)箱、解剖鏡、塑料培養(yǎng)皿(3．5 cm)、*。

(三)實(shí)驗(yàn)方法

1.將細(xì)胞消化成單個(gè)細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分瓶培養(yǎng)，分成不加藥的對(duì)照組和加入不同劑量藥物的實(shí)驗(yàn)組。

2.根據(jù)細(xì)胞種類和實(shí)驗(yàn)需要，于每個(gè)培養(yǎng)皿分別接種100、200或500個(gè)細(xì)胞。

3.將培養(yǎng)皿置CO2孵箱中，2～3周后取出檢查，可見形成集落。用甲醇固定，再用吉坶薩染液染色。

4.用解剖鏡計(jì)數(shù)每個(gè)培養(yǎng)皿中的集落數(shù)(以50個(gè)細(xì)胞以上者為一個(gè)集落)。

5.計(jì)算5個(gè)培養(yǎng)皿的集落數(shù)均值，再按以下公式計(jì)算集落形成百分率。

(四)結(jié)果與分析

    用對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組的集落形成百分率作圖或繪制成曲線，并進(jìn)行比較。

(五)注意事項(xiàng)

1．每個(gè)培養(yǎng)皿接種的細(xì)胞數(shù)不宜過(guò)多，一般不應(yīng)超過(guò)500個(gè)，否則影響計(jì)數(shù)集落數(shù)。

2．為更方便而準(zhǔn)確地計(jì)數(shù)集落數(shù)，可先用記號(hào)筆將培養(yǎng)皿劃分成4個(gè)區(qū)域，并將集落用筆點(diǎn)出，然后進(jìn)行計(jì)數(shù)。