實(shí)驗(yàn)步驟

一、酵母菌糖發(fā)酵試驗(yàn)

1)   糖發(fā)酵基礎(chǔ)液配制好后，按培養(yǎng)液容量的1%加入糖，分裝于杜氏發(fā)酵管中（培養(yǎng)液的高度約為4-5厘米），再在試管內(nèi)加入倒置的小玻管（約0.4×2.0－2.5厘米）一支。每種糖設(shè)三個(gè)重復(fù)管，<121℃>高壓滅菌15分鐘。細(xì)胞
2)   將酵母分別接入上述各發(fā)酵管中，置<30℃>下培養(yǎng)48-72小時(shí)，另以不接種者作對(duì)照
3)   如產(chǎn)酸則培養(yǎng)液pH值下降而變黃色；如產(chǎn)氣，則必先產(chǎn)酸，并在杜氏小管頂端出現(xiàn)氣泡。
4)   結(jié)果記錄。以“ "表示產(chǎn)酸，“<0">表示產(chǎn)氣，“＋"表示產(chǎn)酸產(chǎn)氣，“－"表示無(wú)變化，“堿"表示產(chǎn)堿。 

二、酵母菌碳源同化試驗(yàn)
生長(zhǎng)圖譜法
1)   無(wú)碳培養(yǎng)基內(nèi)加入2%的水洗瓊脂，融化后冷卻至45<-50℃>，到至平板。
2)   接種新鮮培養(yǎng)的啤酒酵母于1毫升無(wú)菌生理鹽水內(nèi)，攪勻后倒入上述未凝平板內(nèi)，搖勻待凝。
3)   皿底用特種蠟筆寫(xiě)上被測(cè)試各種碳源的標(biāo)記。
4)   用不銹鋼匙，按標(biāo)記加入相應(yīng)的米粒大小的碳源，并以葡萄糖作對(duì)照。
5)   <28℃>下培養(yǎng)24-48小時(shí)后觀察結(jié)果。

三、酵母菌氮源同化試驗(yàn)  

1、液體試管法

方法同二，以被測(cè)試的氮源代替碳源，不加任何氮源作空白對(duì)照。

2、生長(zhǎng)圖譜法

方法同二，以被測(cè)試的氮源代替碳源，不加任何氮化物作空白對(duì)照。

3、結(jié)果觀察

1）液體試管中溶液pH值的變化。

2）生長(zhǎng)圖譜中測(cè)量形成菌落的大小，說(shuō)明對(duì)各種氮源的利用情況。

四、酵母菌生長(zhǎng)曲線的測(cè)定試驗(yàn) 

1、將培養(yǎng)24小時(shí)左右的酵母斜面菌種，用無(wú)菌水洗下菌苔，以3000轉(zhuǎn)/分的速率離心，得菌體。將酵母菌體沉淀物再用無(wú)菌水洗2-3次后，制備酵母菌懸液（細(xì)胞數(shù)量約106左右/毫升），測(cè)數(shù)備用。

2、取上述菌懸液1毫升于盛有清亮的酵母增殖培養(yǎng)液的試管中，<25℃>下培養(yǎng)，以此為起始時(shí)間，記錄起始溶液的細(xì)胞數(shù)。并在培養(yǎng)1，2，4，6，8，9，10，11，12，14，16，20，22，24小時(shí)時(shí)分別取樣檢測(cè)酵母菌細(xì)胞數(shù)量。

3、酵母菌細(xì)胞數(shù)量的檢測(cè)

    方法①：活菌計(jì)數(shù)法。此法是將以上定時(shí)取出的被檢樣品作一系列稀釋后，取一定量體積（在0.1-1毫升之間）的稀釋液涂布于盛有固體培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿內(nèi)，在<25℃>下培養(yǎng)24小時(shí)左右，計(jì)算培養(yǎng)皿內(nèi)菌落數(shù)就可測(cè)出溶液中活菌數(shù)量。

    方法②：血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)法。此法是先將以上定時(shí)取出的被檢樣品作一系列稀釋后，使菌落數(shù)約為105-106個(gè)/毫升，取一滴稀釋液滴于血球計(jì)數(shù)板內(nèi)，在顯微鏡下直接計(jì)算細(xì)胞總數(shù)。

4、繪制生長(zhǎng)曲線

    以酵母菌細(xì)胞數(shù)的對(duì)數(shù)作為縱坐標(biāo)，以培養(yǎng)時(shí)間作為橫坐標(biāo)，畫(huà)出酵母菌的生長(zhǎng)曲線。并分析酵母菌群體的生長(zhǎng)規(guī)律。