細胞膜的通透性原理和操作步驟分解
一、實驗目的
1.了解細胞膜對物質通透性的一般規(guī)律。
2.了解溶血現(xiàn)象及其發(fā)生機制。
二、實驗原理
細胞膜是細胞與環(huán)境進行物質交換的選擇通透性屏障。它是一種半透膜，可選擇性控制物質進出細胞。各種物質出入細胞的方式是不同的，水是生物界zui普遍的溶劑，水分子可以按照物質濃度梯度從滲透壓低的一側通過細胞膜向滲透壓高的一側擴散，這種現(xiàn)象就是滲透。滲透作用是細胞膜的主要功能之一。將紅細胞放在低滲鹽溶液中，水分子大量滲到細胞內，可使細胞脹破，血紅蛋白釋放到介質中，由不透明的紅細胞懸液變?yōu)榧t色透明的血紅蛋白溶液，這種現(xiàn)象稱為溶血。將紅細胞放在某些等滲鹽溶液中，由于紅細胞膜對各種溶質的通透性不同，膜兩側的滲透壓平衡會發(fā)生改變，也會發(fā)生溶血現(xiàn)象。因此，發(fā)生溶血現(xiàn)象所需時間長短可作為測量物質進入紅細胞速度的一種指標。本實驗選用紅細胞作為細胞膜透性的實驗材料，將其放入不同的介質溶液中，觀察紅細胞的變化。
三、實驗用品
（一） 材料 雞血細胞
（二）器材 普通顯微鏡、普通離心機、扭力天平、10ml 試管、10ml 刻度離心管、試管架，2ml 注射器（無需針頭）或5ml 移液管、洗耳球、滴管、載玻片、擦鏡紙、記號筆等。
（三）試劑
1．Alsever 溶液
葡萄糖 2.05g
檸檬酸鈉 （Na9C6H5O7.2H2O） 0.89g
檸檬酸（C6H 6O7.H2O） 0.05g
氯化鈉 0.42g
蒸餾水 100ml
調PH 至7.2，過濾滅菌或高壓滅菌10min，置4℃冰箱保存。
2. 0.128 mol/L NaCl 溶液。
3． 0.05 mol/L NaCl 溶液。
4． 0.4 mol/L NaCl 溶液。
3. 0.128 mol/L NH4Cl 溶液。
4. 0.128 mol/L NH4AC 溶液。
5. 0.128 mol/L NaNO3溶液。
7. 0.32 mol/L 葡萄糖。
8. 0.32 mol/L 甘油。
9. 0.32 mol/L 乙醇。
10. 0.32 mol/L 丙酮。
11. 蒸餾水。
四、實驗操作
1．從集市買一只活雞現(xiàn)殺取血5ml（防止污染），放入盛有20ml Alsever’s 液瓶中，混勻后置冰箱保存?zhèn)溆茫? 周內使用）。
2. 使用前，取用Alsever’s 液保存的新鮮雞血5ml ， 加入8ml 的0.128 mol/L 的 NaCl 溶液，小心混勻，1000 r/min 離心5min，如此3 次洗滌，zui后配成30%的雞紅細胞（CRBC）懸液。
3. 取 11 支試管，按附表中所示測試溶液，分別取樣各3ml，作出標記后，各管均加入紅細胞懸液2 滴，混勻后靜置于溫室中，觀察各支試管中發(fā)生溶血的時間及其變化。
五、觀察結果
1. 試管內液體分兩層：上層淺黃色透明，下層紅色不透明為不溶血（－），鏡檢紅細胞完好呈雙凹盤狀。
2. 如果試管內液體混濁，上層帶紅色者，稱不*溶血（＋或＋＋），鏡檢有部分紅細胞呈碎片。
3. 如果試管內液體變紅而透明者，稱*溶血（＋＋＋），鏡檢發(fā)現(xiàn)細胞全部呈碎片。
六、實驗建議
1. 雞血在離心時，試管均需在扭力天平上平衡。
2. 目測紅細胞體積或置于帶刻度的離心管中，加入生理鹽水配成30%的紅細胞懸液；
3. 試管中有紅細胞和測試溶液時，不應強力搖晃，以免造成人為的紅細胞破裂。
上海恒遠生物所代理人elisa試劑盒，酶聯(lián)免疫試劑盒均提供免費代測服務，具體參數(shù)數(shù)據(jù)請我司業(yè)務員。
