| 一、經(jīng)驗總結
1. 首先細胞的接種密度一定不能過大，一般每孔1000個左右就夠了，我認為寧少勿多。尤其是對于腫瘤細胞。10000/孔是太高了，這樣即使藥物有作用，MTT方法也是表現(xiàn)不出的，*點板濃度在4000-5000/孔，太少的話SD值會很大。 2. MTT本身就是比較粗的實驗，增殖率10%左右的波動都不算奇怪。特別是新手，20%的波動也是常見的，所以很可能是技術原因引起的，特別是種板技術一定要過關。 3. 我做的是腫瘤細胞的MTT實驗，這種細胞長的很快一開始我是用100000/ML的濃度來接種的，結果細胞長的太滿結果是沒有梯度也沒有線性關系.后來調(diào)整濃度，用過40000~80000/ML的濃度都做過MTT實驗，結果發(fā)現(xiàn)做的結果比較好點的是60000~70000/ML的濃度組的.用40000/M的濃度的組，由于細胞少，藥物作用的梯度還是有，只是沒有很好的線性關系.還有根據(jù)細胞生長速度以及藥物的特性（有時間依賴性和濃度依賴性的藥物）來確定培養(yǎng)時間是48小時還是72小時. 4. 注意細胞懸液一定要混勻，已避免細胞沉淀下來，導致每孔中的細胞數(shù)量不等，可以每接幾個就要再混勻一下。加樣器操作要熟練，盡量避免人為誤差。雖然移液器比移液管得多，但是如果操作不熟，CV會在8%左右。另外，吹散次數(shù)過多也會影響細胞活力。所以要熟練鞋、快些上板。 二、實驗心得分享 1. 吹打時懸液總量不能太多，達到吸管吸液量的3-4倍，可能比較容易混勻。10 ml的離心管里面裝3-4 ml的懸液：懸液太少容易吹起很多氣泡，懸液太多又不容易吹成單細胞懸液。 2. 吸管的吸液量在1 ml左右：吸液量過多的話，一下吸起很多液體，管中所剩就很少，這樣吹打容易起泡，吸液量過少，吹打的力度就不夠，吹打就會不均勻。如果是吸液量1 ml多的吸管，總液量在5 ml左右為益。 3. 吸的時候要在懸液底部，然后提起來一點，但是吹下去的時候不要離開液面，否則容易吹打出氣泡。 4. 吹打次數(shù)100左右，就可以吹打均勻了（有人認為加細胞前吹打30-50次基本就差不多均勻了。加細胞的時候每接種2孔反復吹打3次，每吹打3次后槍頭垂懸與細胞懸液中5秒鐘，然后再以一定的速度吸取懸液。） 5. 向每孔中用槍頭加入細胞時不要太快，否則你會發(fā)現(xiàn)細胞在加入的瞬間會由于槍頭的沖力在孔底聚集一堆，一般都在孔的底部*，而周邊很少，這種不均勻的分散會產(chǎn)生接觸抑制，影響細胞的生長。所以速度不能太快也不能太慢。我習慣每塊板加完后平握手中，向左3下，向右3下，在往返回復3下移動，目的是使得細胞能分散的均勻些。（鋪板技術是MTT實驗的關鍵，也是基礎，一定要練好。曾經(jīng)有同學用漩渦振蕩器混勻細胞，zui后細胞全死了，建議不要采用這種方法混勻細胞。 |
| 一、經(jīng)驗總結
1. 首先細胞的接種密度一定不能過大，一般每孔1000個左右就夠了，我認為寧少勿多。尤其是對于腫瘤細胞。10000/孔是太高了，這樣即使藥物有作用，MTT方法也是表現(xiàn)不出的，*點板濃度在4000-5000/孔，太少的話SD值會很大。 2. MTT本身就是比較粗的實驗，增殖率10%左右的波動都不算奇怪。特別是新手，20%的波動也是常見的，所以很可能是技術原因引起的，特別是種板技術一定要過關。 3. 我做的是腫瘤細胞的MTT實驗，這種細胞長的很快一開始我是用100000/ML的濃度來接種的，結果細胞長的太滿結果是沒有梯度也沒有線性關系.后來調(diào)整濃度，用過40000~80000/ML的濃度都做過MTT實驗，結果發(fā)現(xiàn)做的結果比較好點的是60000~70000/ML的濃度組的.用40000/M的濃度的組，由于細胞少，藥物作用的梯度還是有，只是沒有很好的線性關系.還有根據(jù)細胞生長速度以及藥物的特性（有時間依賴性和濃度依賴性的藥物）來確定培養(yǎng)時間是48小時還是72小時. 4. 注意細胞懸液一定要混勻，已避免細胞沉淀下來，導致每孔中的細胞數(shù)量不等，可以每接幾個就要再混勻一下。加樣器操作要熟練，盡量避免人為誤差。雖然移液器比移液管得多，但是如果操作不熟，CV會在8%左右。另外，吹散次數(shù)過多也會影響細胞活力。所以要熟練鞋、快些上板。 二、實驗心得分享 1. 吹打時懸液總量不能太多，達到吸管吸液量的3-4倍，可能比較容易混勻。10 ml的離心管里面裝3-4 ml的懸液：懸液太少容易吹起很多氣泡，懸液太多又不容易吹成單細胞懸液。 2. 吸管的吸液量在1 ml左右：吸液量過多的話，一下吸起很多液體，管中所剩就很少，這樣吹打容易起泡，吸液量過少，吹打的力度就不夠，吹打就會不均勻。如果是吸液量1 ml多的吸管，總液量在5 ml左右為益。 3. 吸的時候要在懸液底部，然后提起來一點，但是吹下去的時候不要離開液面，否則容易吹打出氣泡。 4. 吹打次數(shù)100左右，就可以吹打均勻了（有人認為加細胞前吹打30-50次基本就差不多均勻了。加細胞的時候每接種2孔反復吹打3次，每吹打3次后槍頭垂懸與細胞懸液中5秒鐘，然后再以一定的速度吸取懸液。） 5. 向每孔中用槍頭加入細胞時不要太快，否則你會發(fā)現(xiàn)細胞在加入的瞬間會由于槍頭的沖力在孔底聚集一堆，一般都在孔的底部*，而周邊很少，這種不均勻的分散會產(chǎn)生接觸抑制，影響細胞的生長。所以速度不能太快也不能太慢。我習慣每塊板加完后平握手中，向左3下，向右3下，在往返回復3下移動，目的是使得細胞能分散的均勻些。（鋪板技術是MTT實驗的關鍵，也是基礎，一定要練好。曾經(jīng)有同學用漩渦振蕩器混勻細胞，zui后細胞全死了，建議不要采用這種方法混勻細胞。 |
| 一、經(jīng)驗總結
1. 首先細胞的接種密度一定不能過大，一般每孔1000個左右就夠了，我認為寧少勿多。尤其是對于腫瘤細胞。10000/孔是太高了，這樣即使藥物有作用，MTT方法也是表現(xiàn)不出的，*點板濃度在4000-5000/孔，太少的話SD值會很大。 2. MTT本身就是比較粗的實驗，增殖率10%左右的波動都不算奇怪。特別是新手，20%的波動也是常見的，所以很可能是技術原因引起的，特別是種板技術一定要過關。 3. 我做的是腫瘤細胞的MTT實驗，這種細胞長的很快一開始我是用100000/ML的濃度來接種的，結果細胞長的太滿結果是沒有梯度也沒有線性關系.后來調(diào)整濃度，用過40000~80000/ML的濃度都做過MTT實驗，結果發(fā)現(xiàn)做的結果比較好點的是60000~70000/ML的濃度組的.用40000/M的濃度的組，由于細胞少，藥物作用的梯度還是有，只是沒有很好的線性關系.還有根據(jù)細胞生長速度以及藥物的特性（有時間依賴性和濃度依賴性的藥物）來確定培養(yǎng)時間是48小時還是72小時. 4. 注意細胞懸液一定要混勻，已避免細胞沉淀下來，導致每孔中的細胞數(shù)量不等，可以每接幾個就要再混勻一下。加樣器操作要熟練，盡量避免人為誤差。雖然移液器比移液管得多，但是如果操作不熟，CV會在8%左右。另外，吹散次數(shù)過多也會影響細胞活力。所以要熟練鞋、快些上板。 二、實驗心得分享 1. 吹打時懸液總量不能太多，達到吸管吸液量的3-4倍，可能比較容易混勻。10 ml的離心管里面裝3-4 ml的懸液：懸液太少容易吹起很多氣泡，懸液太多又不容易吹成單細胞懸液。 2. 吸管的吸液量在1 ml左右：吸液量過多的話，一下吸起很多液體，管中所剩就很少，這樣吹打容易起泡，吸液量過少，吹打的力度就不夠，吹打就會不均勻。如果是吸液量1 ml多的吸管，總液量在5 ml左右為益。 3. 吸的時候要在懸液底部，然后提起來一點，但是吹下去的時候不要離開液面，否則容易吹打出氣泡。 4. 吹打次數(shù)100左右，就可以吹打均勻了（有人認為加細胞前吹打30-50次基本就差不多均勻了。加細胞的時候每接種2孔反復吹打3次，每吹打3次后槍頭垂懸與細胞懸液中5秒鐘，然后再以一定的速度吸取懸液。） 5. 向每孔中用槍頭加入細胞時不要太快，否則你會發(fā)現(xiàn)細胞在加入的瞬間會由于槍頭的沖力在孔底聚集一堆，一般都在孔的底部*，而周邊很少，這種不均勻的分散會產(chǎn)生接觸抑制，影響細胞的生長。所以速度不能太快也不能太慢。我習慣每塊板加完后平握手中，向左3下，向右3下，在往返回復3下移動，目的是使得細胞能分散的均勻些。（鋪板技術是MTT實驗的關鍵，也是基礎，一定要練好。曾經(jīng)有同學用漩渦振蕩器混勻細胞，zui后細胞全死了，建議不要采用這種方法混勻細胞。 |
| 一、經(jīng)驗總結
1. 首先細胞的接種密度一定不能過大，一般每孔1000個左右就夠了，我認為寧少勿多。尤其是對于腫瘤細胞。10000/孔是太高了，這樣即使藥物有作用，MTT方法也是表現(xiàn)不出的，*點板濃度在4000-5000/孔，太少的話SD值會很大。 2. MTT本身就是比較粗的實驗，增殖率10%左右的波動都不算奇怪。特別是新手，20%的波動也是常見的，所以很可能是技術原因引起的，特別是種板技術一定要過關。 3. 我做的是腫瘤細胞的MTT實驗，這種細胞長的很快一開始我是用100000/ML的濃度來接種的，結果細胞長的太滿結果是沒有梯度也沒有線性關系.后來調(diào)整濃度，用過40000~80000/ML的濃度都做過MTT實驗，結果發(fā)現(xiàn)做的結果比較好點的是60000~70000/ML的濃度組的.用40000/M的濃度的組，由于細胞少，藥物作用的梯度還是有，只是沒有很好的線性關系.還有根據(jù)細胞生長速度以及藥物的特性（有時間依賴性和濃度依賴性的藥物）來確定培養(yǎng)時間是48小時還是72小時. 4. 注意細胞懸液一定要混勻，已避免細胞沉淀下來，導致每孔中的細胞數(shù)量不等，可以每接幾個就要再混勻一下。加樣器操作要熟練，盡量避免人為誤差。雖然移液器比移液管得多，但是如果操作不熟，CV會在8%左右。另外，吹散次數(shù)過多也會影響細胞活力。所以要熟練鞋、快些上板。 二、實驗心得分享 1. 吹打時懸液總量不能太多，達到吸管吸液量的3-4倍，可能比較容易混勻。10 ml的離心管里面裝3-4 ml的懸液：懸液太少容易吹起很多氣泡，懸液太多又不容易吹成單細胞懸液。 2. 吸管的吸液量在1 ml左右：吸液量過多的話，一下吸起很多液體，管中所剩就很少，這樣吹打容易起泡，吸液量過少，吹打的力度就不夠，吹打就會不均勻。如果是吸液量1 ml多的吸管，總液量在5 ml左右為益。 3. 吸的時候要在懸液底部，然后提起來一點，但是吹下去的時候不要離開液面，否則容易吹打出氣泡。 4. 吹打次數(shù)100左右，就可以吹打均勻了（有人認為加細胞前吹打30-50次基本就差不多均勻了。加細胞的時候每接種2孔反復吹打3次，每吹打3次后槍頭垂懸與細胞懸液中5秒鐘，然后再以一定的速度吸取懸液。） 5. 向每孔中用槍頭加入細胞時不要太快，否則你會發(fā)現(xiàn)細胞在加入的瞬間會由于槍頭的沖力在孔底聚集一堆，一般都在孔的底部*，而周邊很少，這種不均勻的分散會產(chǎn)生接觸抑制，影響細胞的生長。所以速度不能太快也不能太慢。我習慣每塊板加完后平握手中，向左3下，向右3下，在往返回復3下移動，目的是使得細胞能分散的均勻些。（鋪板技術是MTT實驗的關鍵，也是基礎，一定要練好。曾經(jīng)有同學用漩渦振蕩器混勻細胞，zui后細胞全死了，建議不要采用這種方法混勻細胞。 |
1. 首先細胞的接種密度一定不能過大，一般每孔1000個左右就夠了，我認為寧少勿多。尤其是對于腫瘤細胞。10000/孔是太高了，這樣即使藥物有作用，MTT方法也是表現(xiàn)不出的，*點板濃度在4000-5000/孔，太少的話SD值會很大。
2. MTT本身就是比較粗的實驗，增殖率10%左右的波動都不算奇怪。特別是新手，20%的波動也是常見的，所以很可能是技術原因引起的，特別是種板技術一定要過關。
3. 我做的是腫瘤細胞的MTT實驗，這種細胞長的很快一開始我是用100000/ML的濃度來接種的，結果細胞長的太滿結果是沒有梯度也沒有線性關系.后來調(diào)整濃度，用過40000~80000/ML的濃度都做過MTT實驗，結果發(fā)現(xiàn)做的結果比較好點的是60000~70000/ML的濃度組的.用40000/M的濃度的組，由于細胞少，藥物作用的梯度還是有，只是沒有很好的線性關系.還有根據(jù)細胞生長速度以及藥物的特性（有時間依賴性和濃度依賴性的藥物）來確定培養(yǎng)時間是48小時還是72小時.
4. 注意細胞懸液一定要混勻，已避免細胞沉淀下來，導致每孔中的細胞數(shù)量不等，可以每接幾個就要再混勻一下。加樣器操作要熟練，盡量避免人為誤差。雖然移液器比移液管得多，但是如果操作不熟，CV會在8%左右。另外，吹散次數(shù)過多也會影響細胞活力。所以要熟練鞋、快些上板。
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