亚洲国产精品二区久久,日本美女后入式午夜视频在线观看,国产污视频在线观看,欧美日韩国产精品中文字幕在线观看

上海瑞齊生物科技有限公司

植原體菌種保藏技術(shù)

時(shí)間:2010-8-15閱讀:1171
分享:

植原體是一類無細(xì)胞壁的原核微生物,能侵染包括農(nóng)作物、林木、花卉、雜草等植物,給農(nóng)、林業(yè)生產(chǎn)帶來巨大損失,近年來,此類病害在某些重要植物處于蔓延和加重的趨勢。這類微生物尚不能在人工培養(yǎng)基上離體培養(yǎng),其細(xì)胞結(jié)構(gòu)、與寄主植物的互作等方面也有其明顯不同特點(diǎn),研究制定此類微生物的保藏技術(shù)規(guī)程,對于植原體菌種資源的規(guī)范和安全保藏、科學(xué)研究及合理利用具有重要意義

1   范圍本規(guī)程規(guī)定了植原體菌種保藏的基本原則、方法及技術(shù)要求。

本規(guī)程適用于各類植原體菌種的保藏。
2   術(shù)語與定義
2.1植原體  phytoplasma
指寄生于植物韌皮部和介體昆蟲體內(nèi)的、具有三層單位膜結(jié)構(gòu)的無細(xì)胞壁的原核生物。一般引起植物葉片黃化和發(fā)育畸形等癥狀。
2.2植物組織培養(yǎng)  plant tissue culture
在無菌的條件下,將離體的植物器官和組織在人工控制的環(huán)境下培養(yǎng),使其再生形成完整植株的過程。培養(yǎng)植原體—植物共生體即是培養(yǎng)已感染植原體病菌的植物外植體。
 
3   原理
植原體菌種尚不能在離體人工培養(yǎng)基上培養(yǎng)。被感染的寄主植物攜帶植原體,因而通過對植物莖段的繁殖,即可達(dá)到對所攜帶植原體的繁殖和培養(yǎng)。植物組織培養(yǎng)和營養(yǎng)繁殖,使植原體所受的選擇壓力較低,較低的溫度條件可大大減緩植物和所感染植原體的代謝活動(dòng),從而減少菌株突變,降低繁殖速度,有效保持菌種原有性狀。
4技術(shù)要求
4.1   保藏方法
用組織培養(yǎng)法保藏感染植原體的植物組織,于5-25 C溫度范圍內(nèi)保藏。
4.2植物組織培養(yǎng)基
選用適于植物組織正常生長的培養(yǎng)基,不含四環(huán)素簇抗生素或其它對植原體生長和繁殖有抑制作用的成分。
4.3   培養(yǎng)溫度和光照
培養(yǎng)溫度20-28 ℃為宜
光照強(qiáng)度在1000-3000  lx,光期為10-14h/d
4.4   保藏溫度和時(shí)間
常溫保藏(20-28 ℃),保藏時(shí)間1-3個(gè)月
低溫保藏(6-10 ℃),保藏時(shí)間6個(gè)月至1年。
注:保藏溫度低于4 ℃會(huì)凍傷植物組織材料而導(dǎo)致植原體死亡。
4.5   保藏期檢測
定期檢查保藏菌種的房間、冷庫、冰箱的溫度、濕度。
檢查各保藏試管有無雜菌污染現(xiàn)象,如發(fā)現(xiàn)雜菌污染,則取出該管重新移植,培養(yǎng)后補(bǔ)缺。
4.6移植復(fù)核
大量植原體-植物共生體進(jìn)行移植時(shí),各菌株的編號、所用培養(yǎng)基需仔細(xì)核對無誤。每次移植培養(yǎng)后,對照原保藏的菌株和菌種順序號卡片名錄,核實(shí)無誤再行存放。
4.7     保藏指標(biāo)
當(dāng)獲得的組培苗表現(xiàn)典型癥狀或在熒光顯微鏡下觀察到特異植原體 DNA 熒光后即可進(jìn)行菌株的保藏。
5     操作方法與步驟
5.1   帶菌外植體采集
在田間采集表現(xiàn)典型癥狀的新鮮枝條,剪去葉和嫩稍,經(jīng)酒精和升汞等消毒劑表面消毒后,截成具節(jié)莖段,移入培養(yǎng)基上培養(yǎng)。
5.2   無雜菌組培苗的獲得
外植體長出新枝后,選無雜菌感染的外植體,截取新枝,移入新配制的培養(yǎng)基上培養(yǎng)和繁殖。如培養(yǎng)基被雜菌污染,將組培苗再進(jìn)行表面消毒處理,移入新的培養(yǎng)基上培養(yǎng),重復(fù)操作2-3次,直至獲得無雜菌組培苗為止。
5.3    組織帶菌鑒定
用DAPI熒光顯微鏡技術(shù)和PCR技術(shù)鑒定組織帶菌狀況和濃度。
DAPI熒光顯微鏡技術(shù)步驟:取植物幼莖、葉柄或根等,進(jìn)行組織切片,厚度在100mm左右,用5%戊二醛固定2小時(shí)左右,用0.1M磷酸緩沖液(pH7.0)洗滌后,用1mg  /ml  4'6-二瞇基-2-苯基吲哚(DAPI)染色,zui后置于落射熒光顯微鏡下檢查韌皮部特異性植原體DNA熒光,激發(fā)濾光片波長為365nm,阻斷濾光片波長為420nm。
PCR技術(shù)步驟:從組織中提取植物和植原體總DNA,用植原體16S  rRNA等基因序列的引物進(jìn)行PCR基因擴(kuò)增,然后進(jìn)行瓊脂糖電泳,檢測特異性擴(kuò)增產(chǎn)物譜帶。
5.4  常溫保藏
植原體-植物共生體在適宜的組織培養(yǎng)基上培養(yǎng),并正常溫度和光照下(20-28 C,光照強(qiáng)度在1000-3000  lx)進(jìn)行保藏,保藏周期為1-3個(gè)月。
5.5   低溫保藏
將正常溫度和光照下(20-28 C,光照強(qiáng)度在1000-3000  lx)培養(yǎng)的植原體-植物共生體移入含組織培養(yǎng)基的試管內(nèi),移入6-10 C低溫冷藏柜內(nèi)保藏,1-2個(gè)月將試管暴露于正常培養(yǎng)溫度和光照條件下補(bǔ)光2-3天,然后存放于低溫冷藏柜繼續(xù)保藏,保藏周期為6個(gè)月至1年以上。

會(huì)員登錄

×

請輸入賬號

請輸入密碼

=

請輸驗(yàn)證碼

收藏該商鋪

X
該信息已收藏!
標(biāo)簽:
保存成功

(空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)

常用:

提示

X
您的留言已提交成功!我們將在第一時(shí)間回復(fù)您~

以上信息由企業(yè)自行提供,信息內(nèi)容的真實(shí)性、準(zhǔn)確性和合法性由相關(guān)企業(yè)負(fù)責(zé),環(huán)保在線對此不承擔(dān)任何保證責(zé)任。

溫馨提示:為規(guī)避購買風(fēng)險(xiǎn),建議您在購買產(chǎn)品前務(wù)必確認(rèn)供應(yīng)商資質(zhì)及產(chǎn)品質(zhì)量。

在線留言
日本高清一区二区三区在线观看| 大鸡巴猛插小穴视频| 777米奇在线视频无码| 国产一区二区三区三级88| 亚洲日韩国产欧美久久久| 涩涩屋操美女视频| 99热这里只有精品亚洲| 92婷婷伊人久久精品一区二区| 国产成人无码91精品一区| 插插插插插插插插插插插| 看小伙草白女人比的黄片| 中国毛茸茸的操逼| 日韩欧美视频在线观看不卡| 日韩有码视频在线| 国产亚洲欧美日韩在线观看一区| 亚洲一区二区三区精品日韩| 国产精品操大屁股老淑女| 非洲人粗大长硬配种视频| 人妻夜夜添夜夜无码AV| 我要操死你逼视频| 日韩免费一级a毛片在线播放一级| 中文字幕av一区二区三区哈| avtt天堂网先锋伦理| 欧美高清一二三区| 白虎鲍鱼抠逼免费看| 国产精品熟女视频播放| 日韩精品诱惑一区?区三区| 91麻豆精品福利在线观看| 久久久精品亚洲Av| 男男大鸡巴操小屁眼视频| 操美女干逼调教捆绑视频| 97青青草免费在线观看| 99久久久国产精品美女| 大波美女被插的好爽| 思思夜免费公开视频| A级毛片毛片免费观看久| 日韩精品诱惑一区?区三区| 大粗鳮巴r教师人妻91| 大鸡插骚货人人色| 精品一区二区久久久久无码| 精品一区二区三区女性色|