一、為什么所有試劑和檢測樣本要平衡至室溫再進行加樣操作？
溫度是ELISA試劑盒結(jié)合反應(yīng)的重要影響因素。為了使所有樣本在一致的溫度下反應(yīng)，實驗前務(wù)必將所有試劑平衡至室溫，包括檢測樣本。避免因溫度的動力學反應(yīng)差異而導致ELISA試劑盒檢測結(jié)果的不準確。
二、為什么實驗過程中孵育、洗滌需要振蕩？如何振蕩？
振蕩孵育使反應(yīng)更充分，振蕩洗滌使背景更干凈。建議使用酶標專用12孔微孔板振蕩器。
孵育過程振蕩，可以加快、加強抗原抗體分子間的相互碰撞接觸，使得反應(yīng)過程更加，OD值通常會比未振蕩孵育的結(jié)果要高；洗滌過程振蕩，可以使洗板更干凈，在很大程度這能降低背景值，同時可以提高試劑盒檢測的靈敏度。
三、何時終止ELISA試劑盒反應(yīng)？
ELISA試劑盒實驗終需要酶催化底物顯色反應(yīng)來完成，在佳時間終止反應(yīng)是ELISA試劑盒實驗成功的重要因素。在HRP-TMB酶促反應(yīng)系統(tǒng)中，S9出現(xiàn)淡藍色，S1–S3有明顯的階梯型藍色，便需要終止反應(yīng)；或者根據(jù)高濃度標準品孔在1220nm的OD值來決定，OD1220=0.-0.9之間時即可終止。
四、如何獲得良好線性的標準曲線？
按照推薦方式保存標準品；溶解標準品之前需短暫離心，收集粉末；確保標準品溶解和混勻(大約10min)，然再進行續(xù)的系列稀釋步驟，確保每一步都充分混勻且精確移液；顯色的恰當終止；選擇合適的數(shù)學擬合方程繪制標準曲線。
五、ELISA試劑盒實驗為什么必須設(shè)置復(fù)孔？
為獲得更準確的實驗結(jié)果，強烈建議標準品及樣本進行復(fù)孔檢測。因為復(fù)孔檢測可以：
計算平均值，確保實驗結(jié)果更準確；
解決實驗中誤操作造成的跳孔現(xiàn)象；
計算CV值，對實驗的操作和試劑盒的精密度進行評估。
上海.通蔚生物科技有限公司擁有自己的實驗室，備有業(yè)的技術(shù)研發(fā)團隊，長期致力于ELISA試劑盒的研發(fā)與銷售，實驗提供免費代測服務(wù)，并提供技術(shù)服務(wù)！歡迎咨詢！
