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上海酶聯(lián)生物研究所
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閱讀：326發(fā)布時間：2012-11-9
在發(fā)育和干細胞生物學、癌癥研究和藥物開發(fā)中，測定細胞的增殖能力是一種基本方法。Life Technologies推出了一系列產(chǎn)品，可準確地測定細胞在整個細胞周期中的進程。Premo™ FUCCI Cell Cycle Sensor為單個細胞或細胞群體中的細胞周期進程提供了準確、靈敏的讀數(shù)。而Click-iT® EdU assay則能檢測進入DNA合成期的細胞，并將S期的細胞與其他細胞區(qū)分開來。研究細胞周期
Premo™ FUCCI Cell Cycle Sensor是基于兩個細胞周期調(diào)控蛋白geminin和Cdt1，它們分別與綠色和紅色熒光蛋白相融合。Cdt1和geminin蛋白的降解是時間上調(diào)控的，這樣G1期只存在Cdt1，G1/S期存在兩種蛋白，而S、G2和M期只存在geminin。
因此，細胞核的熒光就從紅色（G1）變成綠色（S、G2、M），為監(jiān)控細胞周期進程提供了一種簡單的方法。FUCCI系統(tǒng)是基于BacMam 2.0技術(shù)，它利用桿狀病毒來實現(xiàn)哺乳動物細胞的轉(zhuǎn)導和瞬時表達。BacMam 2.0大大提高了這種基因?qū)肫脚_的效率和實用性。過去與BacMam 1.0不兼容的細胞類型（神經(jīng)元），或轉(zhuǎn)導效果不佳（一些干細胞、CHO）的細胞類型，現(xiàn)在也能通過簡單的一步過程定量轉(zhuǎn)導。BacMam 2.0融合了新元件，大大增強了轉(zhuǎn)導效率和表達水平，故性能改善。
Premo™ FUCCI Cell Cycle Sensor實現(xiàn)了細胞周期進程和細胞分裂的活細胞成像，它也與固定和透化處理兼容。這種細胞周期傳感器是即用型的，操作過程也很簡單——只需將Premo™ FUCCI試劑加入您的細胞，孵育過夜，并利用熒光顯微鏡或流式細胞儀觀察即可。
Click-iT® EdU assay則是我們常用的BrdU分析的替代。在DNA合成過程中，核苷類似物EdU（5-乙炔-2’-脫氧尿苷）摻入新生的DNA鏈中。EdU不是通過抗體檢測，而是基于一個click反應(yīng)——銅催化的疊氮化物和炔烴之間的共價反應(yīng)。EdU核苷中含有炔烴，而Alexa Fluor或Pacific Blue熒光基團上含有疊氮化物。利用成像技術(shù)、流式細胞術(shù)或高內(nèi)涵分析即可判定群體中S期細胞的比例。Click-iT® EdU標記的一個主要優(yōu)勢在于熒光疊氮化物（分子量<~1,000）的體積遠小于BrdU抗體（分子量~150,000），這樣EdU可在溫和條件下?lián)饺耄Ａ袅丝乖暾?，從而實現(xiàn)了下游的抗體分析。與BrdU檢測需要苛刻條件不同，Click-iT®檢測試劑只需要標準的固定和透化即可。
Premo™ FUCCI Cell Cycle Sensor讓細胞周期分析可在活細胞中開展，它與延遲成像結(jié)合時特別有用。對于固定細胞的成像，Click-iT® EdU標記實現(xiàn)了溫和條件下?lián)饺隕dU的檢測
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