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上海酶聯(lián)生物研究所
上海酶聯(lián)生物研究所
閱讀：355發(fā)布時間：2012-9-7
來自中科院上海生科院營養(yǎng)科學研究所，哈佛醫(yī)學院等處的研究人員利用嗎啉寡核苷酸（morpholino-oligonucleotides ，MO）技術(shù)成功構(gòu)建了Zip7 敲除斑馬魚模型，從中揭示鋅轉(zhuǎn)運蛋白Zip7在斑馬魚胚胎發(fā)育及維持鋅離子穩(wěn)態(tài)過程中發(fā)揮重要作用。
文章的通訊作者是上海生命科學研究院營養(yǎng)所王福俤研究員，王福俤博士研究組曾與美國密歇根大學、波士頓兒童醫(yī)院等處科學家合作，在Nature雜志上闡明了TRPML1是一種二價鐵離子（Fe2+ ）通道，今年研究組項目入選了國家自然科學基金杰出青年基金。
必需微量元素鋅是機體多種酶的必需組分或激活因子, 參與DNA復制、蛋白合成、細胞分化等，與發(fā)育、腦功能、骨骼生長、免疫功能及生殖健康等密切相關(guān)，研究已發(fā)現(xiàn)鋅穩(wěn)態(tài)受SLC39A/Zip和SLC30A/ZnT兩個鋅轉(zhuǎn)運家族調(diào)控。
王福俤在國外工作期間詳細研究了SLC39A/Zip家族中ZIP1、ZIP2、ZIP3、ZIP4、ZIP5轉(zhuǎn)運鋅離子的功能及機制，并闡明了ZIP4突變導致小腸攝取鋅離子障礙而引發(fā)人類遺傳性疾病腸病性肢端皮炎的分子機理（Human Molecular Genentics,2004）。
Zip7是SLC39A/Zip家族成員，有研究發(fā)現(xiàn)Zip7主要分布在細胞高爾基體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，對維持細胞生長與凋亡具有作用。然而之前有關(guān)Zip7的研究主要是在細胞水平進行的，Zip7對整個機體功能及發(fā)育的作用尚不清楚。
在這篇文章中，顏廣、張玉超和俞俊磊等研究生在王福俤研究員的指導下利用morpholino-oligonucleotides （MO）技術(shù)成功構(gòu)建了Zip7 knockdown斑馬魚模型。研究發(fā)現(xiàn)Zip7基因沉默以后胚胎發(fā)育異常，采用X射線熒光光譜技術(shù)（XRF）從整體水平觀察了鋅在機體中的分布規(guī)律，發(fā)現(xiàn)Zip7通過調(diào)控鋅在機體不同組織和器官中的分布來影響機體發(fā)育，其作用部位主要是頭部與眼睛。
MO技術(shù)是一種利用miRNA活性敲除、成熟敲除和特異控制的新技術(shù)。 miRNA的活性敲除通常利用靶向miRNA引導鏈的寡核苷酸。靶向miRNA的Morpholino oligonucleotides也能干擾miRNA的活性。單獨利用這種技術(shù)很難控制敲除的特異性。然而，靶向未成熟miRNA的溶核加工位點（nucleolytic processing sites，編者譯）的Morpholino，能夠抑制miRNA的成熟。如此，靶向初級miRNA的成套的不重疊的Morpholino oligos，可以用于特異控制;如果靶向同一個miRNA的兩個不重疊的oligo引發(fā)的表型相同，就能說明表型是由于靶miRNA的活性被敲除引起的，而非脫靶效應。
此外，在進行此項研究過程中，王福俤研究組與健康所科研人員合作，建立了微量元素代謝新基因的ENU化學誘變正向遺傳學篩選平臺，建成一次高通量（約3000個基因組）的斑馬魚金屬離子代謝異常突變體篩選，已篩選出20余個對高濃度致死劑量鋅離子、銅離子或鎘離子呈抵抗或敏感的斑馬魚突變株，為進一步研究發(fā)現(xiàn)調(diào)控微量元素的新基因，理解金屬代謝穩(wěn)態(tài)的分子機制、明確微量元素穩(wěn)態(tài)代謝紊亂相關(guān)疾病奠定了基礎。
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