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上海酶聯(lián)生物研究所
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上海酶聯(lián)生物研究所
閱讀：220發(fā)布時(shí)間：2011-12-19
一、MTT是什么
MTT是一種粉末狀化學(xué)試劑，全稱(chēng)為3-（4,5）-dimethylthiahiazo （-z-y1）-3,5-di- phenytetrazoliumromide，漢語(yǔ)化學(xué)名為 3-（4，5-二甲基噻唑-2）-2，5-二苯基四氮唑溴鹽，商品名：噻唑藍(lán)。是一種黃顏色的染料。
二、MTT法用來(lái)做什么
簡(jiǎn)單地說(shuō)：是一種檢測(cè)細(xì)胞存活和生長(zhǎng)的方法。
MTT主要有兩個(gè)用途
1．藥物（也包括其他處理方式如放射線照射）對(duì)體外培養(yǎng)的細(xì)胞毒性的測(cè)定；
2．細(xì)胞增殖及細(xì)胞活性測(cè)定。
三、為何MTT可以用來(lái)做上述工作
檢測(cè)原理為活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲瓚（Formazan）并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無(wú)此功能。二甲基亞砜（DMSO）能溶解細(xì)胞中的甲瓚，用酶標(biāo)儀在490nm波長(zhǎng)處測(cè)定其光吸收值，在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi)，MTT結(jié)晶形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比。根據(jù)測(cè)得的吸光度值（OD值），來(lái)判斷活細(xì)胞數(shù)量，OD值越大，細(xì)胞活性越強(qiáng)（如果是測(cè)藥物毒性，則表示藥物毒性越?。?。
四、實(shí)驗(yàn)所需材料
1．MTT 溶液的配制 通常MTT 配成的終濃度為5mg/ml,須用PBS或生理鹽水做溶劑。
市面上一般MTT的包裝為100mg,250mg或1g
1.1對(duì)于100mg這樣的小包裝，廠家都是將MTT放入小管中的，個(gè)人建議不要再用天平稱(chēng)量分裝，而應(yīng)該一次性將其全配制成溶液，如100mg用20mlPBS來(lái)溶解。 具休做法：預(yù)先在50ml離心管（沒(méi)有的話，可用培養(yǎng)瓶替代）加入20ml PBS，從中先吸取500-1000ul PBS裝入含MTT的小管中，吹打若干次后將其移入50ml離心管，然后再混勻?？梢灾貜?fù)幾次，以使小管中的MTT不殘留于管內(nèi)。將MTT*混勻后，用0.22μm濾膜過(guò)濾以除去溶液里的細(xì)菌，分裝避光（避光袋或是黑紙、錫箔紙包住）可長(zhǎng)期保存于-20度。按細(xì)胞培養(yǎng)板每孔需加10ul計(jì)算，一般每96孔板約需1ml，所以分裝時(shí)可考慮每管分裝1ml。
1.2對(duì)于大包裝，可按上述方法稱(chēng)取一部分溶解，也有人將粉劑分裝在EP管里，用的時(shí)候現(xiàn)配，直接往培養(yǎng)板中加。
注意事項(xiàng)：
l在配制和保存的過(guò)程中，容器用鋁箔紙包住。
l配成的MTT需要無(wú)菌，MTT對(duì)菌很敏感
lMTT一般現(xiàn)用現(xiàn)配，過(guò)濾后4度避光保存兩周內(nèi)（個(gè)人曾做過(guò)4度避光保存4周的MTT溶液，效果仍然不錯(cuò)）有效，或配制成5mg/ml保存在-20度長(zhǎng)期保存，避免反復(fù)凍融，小劑量分裝，用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光以免分解。當(dāng)MTT變?yōu)榛揖G色時(shí)就不能再用。
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