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上海酶聯(lián)生物研究所
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閱讀：332發(fā)布時間：2012-09-12
上海酶聯(lián)生物研究所
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人顆粒溶素ELISA檢測試劑盒
試驗原理：
GNLY試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知GNLY濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將GNLY和*標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌，去除未結合的酶結合物，然后加入底物A、B，和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中GNLY的濃度呈比例關系。
自備材料
蒸餾水。
加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
振蕩器及磁力攪拌器等。
安全性
避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。
實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。
人顆粒溶素ELISA檢測試劑盒
操作注意事項
試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。
實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。
不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
底物A應揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
樣品收集、處理及保存方法
血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液
保存------如果樣品不立即使用，應將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
人顆粒溶素ELISA檢測試劑盒
操作步驟
使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產生加樣上的誤差。
根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應孔內。
加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的*標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。
甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。
取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應立即測定結果。
在450nm波長處測定各孔的OD值。
局限
6號標準品以上的結果為非線性的，根據(jù)此標準曲線無法得到的結果。
試劑盒性能
1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值為0.990。
2. 特異性：不與其它細胞因子反應。
3. 重復性：板內、板間變異系數(shù)均小于10%。
人顆粒溶素ELISA檢測試劑盒
結 果 判 斷 與 分 析
1、儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值
2、以吸光度OD值為縱坐標（Y），相應的GNLY標準品濃度為橫坐標（X），做得相應的曲線，樣品的GNLY含量可根據(jù)其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。
3、檢測值范圍：0-80ng/ml
4、敏感度： 0.1 ng/ml3-（3,4-Dihydroxyphenyl）-2-methyl-L-alanine 左旋* [41372-08-1] 100g
Dihydroxypropyl theophylline 二羥丙* [479-18-5] 100g
4,6- Dihydroxypyrimidine 4, 6 - 二羥基嘧啶 [1193-24-4] 500g
Dithiooxamide 二硫代乙酰胺 [79-40-3] 5g
Dithizone 鉛試劑 [60-10-6] 50g
DNA Native E.coli / 10mg
3,5-Dihydroxytoluene, monohydrate 3,5-二羥基甲苯一水 [6153-39-5] 5g
3,5-Diiodo-L-tyrosine, dihydrate 3,5-二碘-L-*二水物 [18835-59-1] 25g
Diisooctylamine 二異辛胺 [106-20-7] 100ml
N,N′-Diisopropylcarbodiimide （DIC） N,N'-二異丙基碳酰亞胺 [693-13-0] 100g
Diisopropyl ether 異丙醚 [108-20-3] 250ml
N,N-Diisopropylethylamine （Hünig’s base’, N-Ethyldiisopropylamine, DIPEA） N，N-二異丙基乙胺（N-乙基二異丙胺） [7087-68-5] 500ml
Dimenhydrinate * [523-87-5] 100g
2,3-Dimercapto-1-propanesulfonic acid, sodium salt, monohydrate 2,3-二巰基丙烷磺酸鈉鹽一水 [207233-91-8] 100g
2,3-Dimercapto-1-propanol 二巰基丙醇 [59-52-9] 100ml
3,4-Dimethoxybenzaldehyde 藜蘆醛 [120-14-9] 500g
1,3-Dimethoxybenzene 間苯二甲醚 [151-10-0] 250ml
1,4-Dimethoxybenzene 對二甲氧基苯 [150-78-7] 5g
3,3’-Dimethoxybenzidine, dihydrochloride 3,3 -二甲氧基聯(lián)苯胺鹽酸鹽 [20325-40-0] 100g
Flunixin meglumine 氟尼辛* [42461-84-7] 100g
9-Fluorenone-4-carboxylic acid 9-芴酮-4-甲酸 [6223-83-2] 25g
Fluorescein, free acid 熒光素 [2321-07-5] 100g
DTAC 十二烷基 -*基氯化銨 [112-00-5] 250g
3,5-Dimethoxybenzoic acid 3,5-二甲氧基苯甲酸 [1132-21-4] 250g
2,7-Dimethoxynaphthalene 2,7-二甲氧基萘 [3469-26-9] 100g
N,N-Dimethylacetamide N’,N-二甲基乙酰胺 [127-19-5] 250ml
6-Dimethylallylaminopurine 6-（異戊烯基氨基）嘌呤 [2365-40-4] 1g
6-Dimethylallylamino purine riboside （2iP Riboside） 6-（γ,γ-二甲基烯丙基氨基）嘌呤核苷 [7724-76-7] 100mg
Dimethylamine hydrochloride 二甲胺鹽酸鹽 [506-59-2] 500g
4-（Dimethylamino）-benzaldehyde 4-（二甲氨基）苯甲醛 [100-10-7] 100g
5-（p-Dimethylaminobenzal） rhodanine 玫瑰紅銀試劑 [536-17-4] 25g
2-（Dimethylamino）ethyl methacrylate 甲基丙烯酸二甲氨乙酯 [2867-47-2] 100g
商鋪：http://m.kytsldc.cn/st32881/
主營產品：ELISA試劑盒，人ELISA試劑盒，小鼠ELISA試劑盒，豚鼠ELISA試劑盒，兔ELISA試劑盒，羊ELISA試劑盒，牛ELISA試劑盒，雞ELISA試劑盒，鴨ELISA試劑盒，植物ELISA試劑盒
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