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上海酶聯(lián)生物研究所
上海酶聯(lián)生物研究所
閱讀：1704發(fā)布時間：2011-4-26
HCG是由兩個非共價鍵相連的肽鏈組成的糖蛋白激素。其單個亞基不具有生物活性，當(dāng)連接成完整化合物時始具活性，分子量約為 4.7萬。其主要功能就是刺激黃體，有利于雌激素和*持續(xù)分泌，以促進(jìn)了宮蛻膜的形成，使胎盤生長成熟。HCGα亞單位的氨 基酸排列與黃體生長激素（LH）α亞單位相似，故用完整的抗HCG分子的抗體測定HCG時與LH間有免疫交*反應(yīng)。但它們的β亞 單位各不相同。因此為避免交*反應(yīng)，目前均采用高將近的抗β-HCG單克隆抗體進(jìn)持特異的HCG檢查，近年來還有報道采用抗β- HCG羧基末端肽單克隆抗體以進(jìn)一步提高檢測的敏感性和特異性。
?。ㄒ唬┠z乳凝集抑制試驗和血凝抑制試驗
1960年Wide及Gemzell開始采用膠乳凝集抑制試驗（latex agglutination inhibitiontest,LAIT）技術(shù)測定尿中HCG，即將尿液與抗 HCG血清作用后，加入已吸附抗原的膠乳，如尿中含HCG較多，則先與抗 HCG結(jié)合，不再有多余的抗 HCG與膠乳產(chǎn)生凝集而仍呈均勻的乳膠狀，是為陽性。相反，不含HCG尿不與抗血清作用，當(dāng)加入吸附抗原的膠乳后，抗血清可與膠 乳抗原反應(yīng)，出現(xiàn)明顯的“特”特性凝集顆粒，即為陰性。也可利用血細(xì)胞的血凝抑制試驗（hemoagglutination inhibition test,HAIT），其原理與膠乳法一致只是載體由膠乳改成羊紅細(xì)胞。這兩種試驗方便簡便，靈敏度為100-500Mu/ML ，適合大批標(biāo)本檢查，但因特異性差，不能定量，已逐漸被單克隆抗體法所取代。
（二）放射免疫試驗（RIA）
利用放射標(biāo)記的HCG與被檢測尿中的HCG競爭性地結(jié)合抗-HCG抗體，當(dāng)被檢尿中HCG增加時，結(jié)合物的放射性減低，與不 同含量標(biāo)準(zhǔn)品對比可測尿中HCG的含量。使定量檢測成為可能。
由于RIA需一定設(shè)備，試驗手續(xù)繁甭，且有核素污染問題，不適用于臨床常規(guī)應(yīng)用。
（三）酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）
該方法目前已廣泛應(yīng)用于臨床，其基本原理是運用夾心免疫酶分析技術(shù)。即采用HCG單克隆抗體包被于固相表面，樣品中的HCG 都將與支持物表面的抗體相結(jié)合。與樣品一孵育后，沖洗耳恭聽表面，然后加入特異性酶標(biāo)抗β-HCG亞基的單克隆抗體，zui后加入酶 作用的基質(zhì)，即產(chǎn)生顏色。該法可目測，靈感度為20-50Mu/ml,采用抗β-HCG單克隆抗體二點酶免疫法進(jìn)行定量，靈敏度 可達(dá)2-10mU/ml。目前免疫酶法進(jìn)一步發(fā)展為更簡便、適于病人自檢的一步法，即免疫酶滲透試驗。
?。ㄋ模﹩慰寺】贵w膠體金試驗
免疫膠體金法是將羊抗人HCG抗血清（多抗）、羊鼠IGG分別固定特制的纖維素試帶上并呈兩條線上下排列，羊抗鼠IGG線在 試帶知上方為陰性對照，羊抗人HCG多抗在下方為測定。試帶條中含均勻分布的膠體金標(biāo)記鼠抗人β-HCG單克隆抗體和無關(guān)的金標(biāo) 記鼠IGG。檢測時將試帶浸入被檢尿液中（液面低于固定的兩條抗體線）后迅速取出。尿液沿試帶上行，尿中的β-HCG在上行過程 中與膠體金標(biāo)記單克隆抗體結(jié)合，待行至羊抗人HCG抗體線時，形成金標(biāo)記的β-HCG單元抗尿HCG羊抗人HCG復(fù)合物而在試帶 上呈茲紅色區(qū)帶，為HCG陽性反應(yīng)，試帶上無關(guān)的金標(biāo)記鼠IGG隨尿液繼續(xù)上行至羊抗鼠IGG處時與之形成紫紅色的金標(biāo)記的抗原 體復(fù)合物是為陰性對照。判斷結(jié)果時，含HCG的尿液試帶可顯示上、下兩條紫紅色線條，而陰性標(biāo)本則只顯出上邊一條紫紅色線。
[方法學(xué)評價] 縱觀HCG檢查方法，有生物激動、化學(xué)法、免疫法等。幾種不同的HCG檢查方法比較見表9-1。免疫法的檢測手段不斷更新、向特 異簡便、快速、普及方向發(fā)展，現(xiàn)已有膠乳或血凝抑制試劑、放射免疫、酶免疫、膠體金紙片法等。除診斷早期妊娠早孕釘，HCG檢查 對病理妊娠職宮外孕及胎盤滋養(yǎng)層疾病的診斷、鑒別、治療及追蹤觀察等均有意義。
表9-1 幾種檢查HCG方法的比較
妊娠試驗名稱 靈敏度（mU/ml或IU/L） 實驗條件 應(yīng)用價值
雄蟾蜍（青蛙）試驗（MT） 3000 需合格動物、簡便需4-12小時 不能定量已淘汰
膠乳凝集抑制試驗（LAIT） 100-500 試劑易得、簡便，5min完成 一般早孕，敏感性低不能定量，少用
紅細(xì)胞凝集抑制試驗（HAIT） 100-500 試劑條件要求高2小時完成 敏感性低，少用半定量
放射免疫試驗（RIA） <2 要求一定設(shè)備，條件要求高2小時完成 試劑可定量，zui靈敏，但很少應(yīng)用
酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）過篩法 多種形式，小珠、板、薄片包被，5-15min完成 半定量，靈敏度好廣泛應(yīng)用
夾心酶免疫試驗 20-50 試劑，免疫應(yīng)用板1-3小時可完成 可定量，靈敏度高常應(yīng)用
免疫膠體金法 10-25 1-15min完成 半定量，靈敏度好廣泛應(yīng)用
[參考值] 妊娠不同時期以及各孕婦之間血清HCG值變化大，一般非孕婦女血HCG<100IU/L，妊娠期間血清HCg 水平見表9-2。
在妊娠zui初3個月，HCG水平每（2.2±0.5）天約升高一倍，尿HCG（HCG半定量法）非孕婦女<25IU/L ，孕40天>5000IU/L,孕60-70天>（8-32）×10 4IU/L（清晨尿HCG水平zui高，接近血清水平）。
表9-2 妊娠期間血清HCG水平
妊娠周數(shù) HCG（IU/L）
0.2-1 5-50
1-2 50-500
2-3 100-5000
3-4 500-10000
4-5 1000-50000
5-6 10000-100000
6-8 15000-200000
2-3月 10000-100000
[臨床意義] HCG的檢查對早期妊娠診斷有重要意義，對與妊娠相關(guān)疾病、滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤等疾病的診斷、鑒別和病程觀察等有一定價值。
1．診斷早期妊娠：孕后35-50天HCG可升至大于2500IU/L。60-70天可達(dá)8萬萬IU/L，多胎妊娠者尿HCG常高于一胎妊娠。
2．異常妊娠與胎盤功能的判斷：①異位妊娠：如宮外孕時，本試驗只有60%的陽性率，在子燥出血3天后，HCG仍可為陽性， 故HCG檢查可作為與其它腹癥的鑒別。HCG常為312-625IU/L。②流產(chǎn)診斷與治療：不*流產(chǎn)如子宮內(nèi)尚有胎盤組織殘 存，HCG檢查仍可呈陽性；*流主或死胎時HCG由陽性轉(zhuǎn)陰性，因此可作為保胎或吸宮治療的參考依據(jù)。③先流產(chǎn)：如尿中HCG 仍維持高水平多不會發(fā)生難免流產(chǎn)。如HCG在2500IU/L以下，并逐漸下降，則有流產(chǎn)的或死胎的可能，當(dāng)降至600IU/L 則難免流產(chǎn)。在保胎治療中，如HCG仍繼續(xù)下降說明保胎無將近，如HCG不斷上升，說明保胎成功。④在產(chǎn)后4天或人工流產(chǎn)術(shù)后1－3天，血清HCG應(yīng)低于1000IU/L，產(chǎn)后9天或人工流產(chǎn)術(shù)后25天，，血清HCG應(yīng)恢復(fù)正常。如不符合這一情況，則應(yīng)考慮 有異?？赡?。
3．滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤診斷與治療監(jiān)測①葡萄胎、惡性葡萄胎、絨毛膜上皮癌及睪刃畸胎瘤等患者尿中HCG顯著升高，右可達(dá)10萬到 數(shù)百萬IU/L，可用稀釋試驗診斷如妊娠12周以前1：500稀釋尿液呈陽性，妊娠12周以后1：250稀釋尿液呈陽性，對葡萄 胎診斷有價值。1：100-1：500稀釋尿液呈陽性對絨毛膜癌也有診斷價值，如男性尿中HCG升高，要考慮睪刃腫瘤如精原細(xì)胞癌、畸形及異位HCG瘤等。②滋養(yǎng)層細(xì)胞腫瘤患者術(shù)后3周后尿HCG應(yīng)<50IU/L,8-12周呈陰性；如HCG不下降 或不轉(zhuǎn)陰，提示可能有殘留病變，這類閏例常易復(fù)發(fā)，故需定期檢查。
4．其它更年期、排卵及雙側(cè)卵巢切除術(shù)均可致黃體生成素升高，因LH與HCG的α肽鏈組成相同而使采用抗HCG抗體的妊娠試驗陽性，此時可用β-HCG的單克隆二點酶免疫測定鑒別。內(nèi)分泌疾病中如腦垂體疾病、甲狀腺功能亢進(jìn)、婦科疾病如卵巢囊腫、子宮 癌等HCG也可增高。近年來發(fā)現(xiàn)惡性腫瘤如默契胎瘤、胰腺癌、胃癌、肝癌、乳腺癌、肺癌等血中HCG也可升高，因此將HCG看作是癌標(biāo)志物之一。但必需結(jié)合臨床情況及其它檢查結(jié)果綜合分析結(jié)果綜合分析判斷。
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