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上海酶聯(lián)生物研究所
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上海酶聯(lián)生物研究所
閱讀：834發(fā)布時(shí)間：2010-6-22
關(guān)于液相維護(hù)的一些小知識(shí)
一、混合溶劑必須要過濾以后才能混合，萬一要混合后過濾的話，只能用有機(jī)的，不能用水系的。因?yàn)樗档牟牧鲜抢w維素，有機(jī)相回或多或少的溶解一點(diǎn)纖維素的，造成污染。
二、標(biāo)樣或樣品用流動(dòng)相溶解（排除特殊情況），可以避免很多麻煩。
三、給色譜柱加溫，溫度升高的目的，部分在于增加溶質(zhì)的溶解度，但更重要的是降低溶劑的黏度，從而改進(jìn)峰形和分離度。注意：溫度升高會(huì)降低保留時(shí)間，這對(duì)分離度也有影響，溫度的變化對(duì)譜帶寬度的影響甚大，而塔板高度受溫度的影響雖然也取決于所采用的色譜類型，而溫度升高總是要降低塔板高度的。
四、C18柱的柱溫一般不要超過40攝氏度，否則健合相容易脫落的。
五、進(jìn)樣器使用，除每次用水清洗外，隔一段時(shí)間后，用甲醇或乙腈反復(fù)吸取，清洗一下。
六、用HPLC進(jìn)行分析時(shí)保留時(shí)間有時(shí)發(fā)生漂移，有時(shí)發(fā)生快速變化，原因何在?如何解決?
答：關(guān)于漂移問題：
1、溫度控制不好，解決方法是采用恒溫裝置，保持柱溫恒定
2、流動(dòng)相發(fā)生變化，解決辦法是防止流動(dòng)相發(fā)生蒸發(fā)、反應(yīng)等
3、柱子未平衡好，需對(duì)柱子進(jìn)行更長時(shí)間的平衡
七、關(guān)于快速變化問題
1、流速發(fā)生變化，解決辦法是重新設(shè)定流速，使之保持穩(wěn)定
2、泵中有氣泡，可通過排氣等操作將氣泡趕出。
3、流動(dòng)相不合適，解決辦法為改換流動(dòng)相或使流動(dòng)相在控制室內(nèi)進(jìn)行適當(dāng)混合
八、液相色譜中峰出現(xiàn)拖尾或出現(xiàn)雙峰的原因是什么?
1、篩板堵塞或柱失效，解決辦法是反向沖洗柱子，替換篩板或更換柱子。
2、存在干擾峰，解決辦法為使用較長的柱子，改換流動(dòng)相或更換選擇性好的柱子
九、毛細(xì)管色譜分流進(jìn)樣時(shí)，非線性分流的主要原因是什么?
1、進(jìn)樣器溫度太低，樣品汽化不*，發(fā)生分級(jí)分流。
2、進(jìn)樣器溫度太高，某些組分可能發(fā)生熱分解，也有的樣品可能發(fā)生催化分解，或樣品部分地被吸附在進(jìn)樣器內(nèi)表面上。
3、在分流點(diǎn)以前樣品沒有混合均勻或混合不充分。
4、系統(tǒng)的進(jìn)樣墊，柱接頭等地方漏氣。
十、做HPLC分析時(shí)，柱壓不穩(wěn)定，原因何在?如何解決?
答：原因可能有：
1、泵內(nèi)有空氣，解決的辦法是清除泵內(nèi)空氣，對(duì)溶劑進(jìn)行脫氣處理；
2、比例閥失效，更換比例閥即可。
3、泵密封墊損壞，更換密封墊即可。
4、溶劑中的氣泡，解決的辦法是對(duì)溶劑脫氣，必要時(shí)改變脫氣方法；
5、系統(tǒng)檢漏，找出漏點(diǎn)，密封即可。
6、梯度洗脫，這時(shí)壓力波動(dòng)是正常的。
十一、做PGS／MS分析時(shí)，如何防止焦油狀污染物進(jìn)入毛細(xì)柱?
答：聚合物，尤其是一些含氮、硫及鹵素的高分子裂解時(shí)，常有焦油狀物質(zhì)產(chǎn)生。為防止這種焦油狀物質(zhì)進(jìn)入毛細(xì)柱造成污染而使柱性能下降，可采用保護(hù)預(yù)柱，即在裂解器與毛細(xì)柱之間接一填充預(yù)柱，通過控制預(yù)柱溫度而使焦油狀物質(zhì)滯留在預(yù)柱內(nèi)，預(yù)注可置于GC氣化室內(nèi)，這樣既容易控制溫度，又減少系統(tǒng)的死體積，當(dāng)然，預(yù)柱填料需經(jīng)常更換。
十二、我zui近更換了另一種牌號(hào)的ODS柱，雖然分離情況仍可以，但保留時(shí)間不能重現(xiàn)，為什么?
答：這是因?yàn)楸环治鑫锟赡芫哂行纬蓺浣〉哪芰?。盡管過去幾年來，填料的制造技術(shù)有了極大的提高，但不同的廠商的ODS填料表面硅醇基的濃度不同。正是這些硅醇基可能與樣品發(fā)生相互作用。因此，同一被分析物中的各組分在不同牌號(hào)的ODS柱上的相對(duì)保留時(shí)間就可能不同。在流動(dòng)相中加入少量競爭物，如三乙基胺（TEA），將會(huì)使硅醇基的成鍵能力飽和，從而保證不同牌號(hào)柱子上的相對(duì)保留時(shí)間具有較好的重現(xiàn)性。
十三、高溫毛細(xì)柱的使用壽命一般為多長?
答：毛細(xì)柱壽命除決定于柱子本身的性能外，在很大程度上取決于使用情況，比如使用溫度、樣品狀態(tài)，進(jìn)樣量等，如果在其使用溫度范圍內(nèi)，樣品干凈，色譜柱不被污染的情況下，柱子壽命一般在2—3年之間。
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