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上海酶聯(lián)生物研究所


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技術文章

48T*IgMELISA檢測試劑盒

閱讀：545發(fā)布時間：2014-2-10

本試劑僅供研究使用  標本：細胞培養(yǎng)上清液

 

試驗原理：

IgM試劑盒是間接法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知IgM濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將IgM和*標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌，去除未結合的酶結合物，*IgMELISA檢測試劑盒然后加入底物A、B，和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中IgM的濃度呈比例關系。

自備材料

  • 蒸餾水。
  • 加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
  • 振蕩器及磁力攪拌器等。

 

安全性

  • 避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。
  • 實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
  • 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

 

操作注意事項

  • 試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。
  • 實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。
  • 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
  • 使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
  • 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
  • 洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
  • 底物A應揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
  • 加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
  • 按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

 

樣品收集、處理及保存方法

  • 血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
  • 血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
  • 細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
  • 保存------如果樣品不立即使用，*IgMELISA檢測試劑盒應將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

 

試劑的準備

標準品：標準品的系列稀釋應在實驗時準備，不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。

  • 洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。

 

操作步驟

  • 使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產生加樣上的誤差。
  • 根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定，能使用復孔的盡量做復孔。
  • 加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的*標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。
  • 甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。
  • 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
  • 甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。
  • 每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。
  • 取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應立即測定結果。
  • 在450nm波長處測定各孔的OD值。

 

局限

6號標準品以上的結果為非線性的，根據此標準曲線無法得到的結果。

 

試劑盒性能

1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990。

2. 特異性：不與人其它細胞因子反應。

3. 重復性：板內、板間變異系數均小于10%。

 

結 果 判 斷 與 分 析

1、儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值

 

2、以吸光度OD值為縱坐標（Y），相應的IgM標準品濃度為橫坐標（X），做得相應的曲線，樣品的IgM含量可根據其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。

 

3、檢測值范圍：0-8.0g/L

 

4、敏感度： 0.01 g/L
 

大鼠金屬硫蛋白(MT)ELISA試劑盒 Rat Metallothionein,MT ELISA Kit Y35226 96T/48T
大鼠心肌特異性肌鈣蛋白T(cTnT)ELISA試劑盒 Rat cardiac isoform of Tropnin T,cTnT ELISA Kit Y35227 96T/48T
大鼠乙酰*酯酶(AChE)ELISA試劑盒  Rat Acetylcholinesterase,AChE ELISA Kit Y35228 96T/48T
大鼠糖缺失性轉鐵蛋白(CDT)ELISA試劑盒  Rat carbohydrate-deficient transferrin,CDT ELISA Kit Y35229 96T/48T
大鼠總膽汁酸(TBA)ELISA試劑盒  Rat Total bile acide,TBA ELISA Kit Y35230 96T/48T
大鼠β2微球蛋白(BMG/β2-MG)ELISA試劑盒 Rat β2-microglobulin,BMG/β2-MG ELISA Kit Y35231 96T/48T
大鼠*結合蛋白(RBP)ELISA試劑盒 Rat Retinol-binding protein,RBP ELISA Kit Y35232 96T/48T
大鼠*釋放激素受體抗體(GNRHR-Ab)ELISA試劑盒 Rat anti-gonadotropin-releasing hormone receptor antibody,GNRHR-Ab ELISA Kit Y35233 96T/48T
大鼠血管性血友病因子裂解蛋白酶(ADAMTS13/vWF-cp)ELISA試劑盒 Rat von Willebrand Factor cleaving protease,ADAMTS-13/vWF-cp ELISA Kit Y35234 96T/48T
大鼠主要堿性蛋白(MBP)ELISA試劑盒  Rat major basic protein,MBP ELISA Kit Y35235 96T/48T
大鼠嗜酸性粒細胞陽離子蛋白(ECP)ELISA試劑盒 Rat eosinophil cationic protein,ECP ELISA Kit Y35236 96T/48T
大鼠鈣調磷酸酶(CaN)ELISA試劑盒  Rat calcineurin,CaN ELISA Kit  Y35237 96T/48T
大鼠抑制素結合蛋白(INHBP)ELISA試劑盒 Rat Inhibin binding protein,INHBP ELISA Kit  Y35238 96T/48T
大鼠抗甲狀腺過氧化物酶抗體(TPO-Ab)ELISA試劑盒 Rat anti-Thyroid-Peroxidase antibody,TPO-Ab ELISA Kit Y35239 96T/48T
大鼠凋亡誘導因子(AIF)ELISA試劑盒 Rat apoptosis inducing factor,AIF ELISA Kit Y35240 96T/48T
大鼠抗雙鏈DNA抗體/天然DNA抗體(dsDNA)ELISA試劑盒  Rat anti-double stranded DNA,dsDNA ELISA Kit Y35241 96T/48T
大鼠堿性磷酸酶(ALP)ELISA試劑盒 Rat alkaline phosphatase,ALP ELISA Kit Y35242 96T/48T
大鼠血管生成素4(ANG-4)ELISA試劑盒 Rat Angiopoietin 4,ANG-4 ELISA Kit Y35243 96T/48T
大鼠脂多糖結合蛋白(LBP)ELISA試劑盒  Rat lipolysaccharide binding protein,LBP ELISA Kit Y35244 96T/48T
大鼠乙醇脫氫酶(ADH)ELISA試劑盒 Rat alcohol dehydrogenase,ADH ELISA Kit Y35245 96T/48T
大鼠乙醛脫氫酶(ALDH)ELISA試劑盒 Rat aldehyde dehydrogenase,ALDH ELISA Kit Y35246 96T/48T
大鼠可溶性CD14(sCD14)ELISA試劑盒 Rat soluble cluster of differentiation 14,sCD14 ELISA Kit Y35247 96T/48T
大鼠繆勒管抑制物質/抗繆勒管激素(MIS/AMH)ELISA試劑盒 Rat Mullerian Inhibiting Substance/Anti-Mullerian *IgMELISA檢測試劑盒hormone,MIS/AMH ELISA Kit Y35248 96T/48T
大鼠雄激素(androgen)ELISA試劑盒 Rat androgen ELISA Kit Y35249 96T/48T


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