細(xì)節(jié)決定成敗，這對(duì)于實(shí)驗(yàn)室科研工作者來(lái)說(shuō)也是如此。
在ELISA測(cè)試盒實(shí)驗(yàn)中的各項(xiàng)操作細(xì)節(jié)有很多，如盡量少用排槍、勤換槍頭，加樣時(shí)由低濃度向高濃度加，因?yàn)檫@樣可以減少跳孔的幾率。而整個(gè)實(shí)驗(yàn)的zui后關(guān)鍵就是結(jié)果的處理方法了，那么在在今天的技術(shù)文章中，上海源葉生物科技有限公司www.shyybio。。ｃｏｍ 為您帶來(lái)的是ELISA測(cè)試盒檢測(cè)結(jié)果分析方法。
①：ELISA實(shí)驗(yàn)中樣品都要做復(fù)孔或三孔，然后計(jì)算每個(gè)濃度標(biāo)準(zhǔn)品的平均OD值，復(fù)孔的變異系數(shù)應(yīng)該小于20%。
②：平均OD值減去空白孔的OD值。
③：制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。
以減去本底后的OD值為X軸，標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為Y軸，利用作圖軟件得出一個(gè)合適的計(jì)算方法。建議使用合適的軟件來(lái)作圖，比如CurveExpert 1.4。這款軟件能夠給出很多種方法(比如直線、半對(duì)數(shù)、對(duì)數(shù)、四參數(shù)方程等)并從中選擇一條zui合適的方程。要想檢驗(yàn)?zāi)硹l曲線是否與表中數(shù)據(jù)吻合，可以將標(biāo)準(zhǔn)品的濃度作為未知數(shù)，將對(duì)應(yīng)的OD值帶入該方程，計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)品的濃度，得到的結(jié)果應(yīng)該與實(shí)際濃度很接近(+/-10%)。選擇擬合度zui高的那條曲線。
如果出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性不好，或平行性不好(雙孔對(duì)照孔的OD值差別很大)，或出現(xiàn)跳孔的現(xiàn)象，可能引起的原因有酶標(biāo)板孔間相互污染、洗板后未能盡快進(jìn)行下一步操作、添加樣品或其它試劑時(shí)操作的方法不對(duì)、孵育位置避光性不佳或蓋板膜沒(méi)有密封好使得水分蒸發(fā)、酶標(biāo)板孔問(wèn)加入的試劑量不同，相對(duì)應(yīng)的解決辦法是加樣時(shí)請(qǐng)小心勿將液體濺人另一孔中，人工洗板時(shí)也請(qǐng)小心，勿將洗滌液濺人另一微孔中、在洗板后及時(shí)進(jìn)行下一步操作、添加試劑時(shí)請(qǐng)懸空滴入，切記勿將槍頭接觸到板孔內(nèi)，吸取不同試劑瓶中的液體時(shí)就要更換一次槍頭、確認(rèn)孵育環(huán)境不透光，蓋板膜將酶標(biāo)板密封好、使用已校正過(guò)的微量加樣器，如將*次加入液體時(shí)槍頭上留有一滴的液體滴下，那么將以后槍頭上留有的液體也滴下，以保證加入液體體積的一致性。
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