（1）培養(yǎng)〖HT5SS〗
甲型流感病毒雖能引起人和多種動(dòng)物的疾病,但大多數(shù)毒株具有比較明顯的宿主特異性.各型流感病毒都能在雞胚內(nèi)良好增殖.初代分離時(shí)應(yīng)用羊膜腔接種法,但許多毒株也能適應(yīng)于雞胚尿囊腔,特別是已在羊膜腔內(nèi)傳代的毒株.丙型流感病毒只能在羊膜腔內(nèi)增殖.多數(shù)流感病毒可在牛胚腎、雞胚腎、猴胚腎和人胚腎細(xì)胞內(nèi)增殖,但各毒株產(chǎn)生細(xì)胞病變的能力不同.檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)物內(nèi)病毒增殖的zui可靠的方法是血細(xì)胞吸附試驗(yàn).流感病毒對(duì)細(xì)胞的吸附,發(fā)生于病毒血凝素與細(xì)胞受體（含神經(jīng)氨酸）之間.雖然病毒的NA也參與反應(yīng),但因其與HA相比,在數(shù)量上只占極少數(shù)（10∶1）,故在病毒與細(xì)胞的zui初吸附中起不到多大作用.據(jù)估計(jì),每個(gè)雞胚絨毛尿囊膜細(xì)胞約有1000～2000個(gè)受體部位.
（2）病毒基因組的復(fù)制與轉(zhuǎn)錄
流感病毒復(fù)制時(shí)可產(chǎn)生兩種基因轉(zhuǎn)錄物：一種是A（+）cRNA,其功能相當(dāng)于mRNA；另一種是A（－）cRNA,是病毒復(fù)制時(shí)產(chǎn)生vRNA的模板.病毒RNA在細(xì)胞內(nèi)zui先轉(zhuǎn)錄出mRNA（+）cRNA,這一過(guò)程稱初始轉(zhuǎn)錄.子代病毒RNA分子的產(chǎn)生稱為二級(jí)轉(zhuǎn)錄,這一過(guò)程是用A（－）cRNA作模板合成vRNA.流感病毒與其它RNA病毒（如小RNA病毒）不同,它不能在去核的細(xì)胞內(nèi)復(fù)制,而且紫外線照射、*或絲裂酶素C都可以阻斷病毒的增殖.上述藥物只能在RNA合成之前,即感染后前2小時(shí)之內(nèi)有此作用.但是DNA合成的化學(xué)抑制物（如阿糖胞苷～AraC）,不能降低感染病毒的增殖.因此,功能性宿主DNA,而不是復(fù)制型宿主DNA,是流感病毒增殖的早期過(guò)程所必需的.實(shí)際上,宿主細(xì)胞的mRNA對(duì)流感病毒RNA的復(fù)制和轉(zhuǎn)錄也是需要的,因?yàn)樗拗骷?xì)胞mRNA的5’端10～15個(gè)核苷酸以及其帽子結(jié)構(gòu),可轉(zhuǎn)移到病毒裸露mRNA的5’端,也可作為病毒基因組轉(zhuǎn)錄的引物.證明流感病毒的復(fù)制需要宿主細(xì)胞RNA多聚酶的參與.
流感病毒的初始轉(zhuǎn)錄,流感病毒的初始轉(zhuǎn)錄（mRNA的合成）包括引物RNA的切割、合成啟始、鏈的延長(zhǎng)和終止等幾個(gè)過(guò)程,由病毒轉(zhuǎn)錄酶復(fù)合體（包括PB1、PB2、PA和NP）來(lái)完成.首先,病毒核酸酶PB2結(jié)合到宿主mRNA的5’端并切下10～13個(gè)核苷酸,這一序列帶有帽子結(jié)構(gòu),可直接作為引物.一般的核酸酶切割后產(chǎn)生的3’端帶有磷酸,而流感病毒的核酸內(nèi)切酶切割后可產(chǎn)生3’端OH基,因此切下的寡核苷酸不需要去磷酸化即可直接作引物.流感病毒核酸內(nèi)切酶作用的發(fā)揮要求帽子上有m7G,其合適的切割位點(diǎn)在嘌呤的3’端,并且距離是10～13個(gè)核苷酸,zui適切割位點(diǎn)是腺嘌呤核苷的3’端.引物加上后,PB1以病毒RNA為模板催化合成的起始和鏈和延伸.加上去的*個(gè)核苷酸是G,它與病毒RNA3’端的第二個(gè)核苷酸互補(bǔ),由此可見(jiàn),病毒轉(zhuǎn)錄酶不轉(zhuǎn)錄3’端*個(gè)核苷酸（U）.當(dāng)鏈延伸到11－15個(gè)核苷酸長(zhǎng)度時(shí),引物從PB2上釋放下來(lái),但其3’端的A仍保留在mRNA上,因此病毒mRNA的5’端仍為AGC.在鏈的延伸過(guò)程中,PB1、PB2和PA一起移動(dòng),但PA的作用還不清楚.當(dāng)鏈延伸到距模板5’端15～22個(gè)核苷酸處時(shí)遇到寡聚U序列,以此為模板合成PolyA尾后使鏈的延長(zhǎng)終止.由此可見(jiàn)病毒mRNA是病毒RNA的不*轉(zhuǎn)錄物.
（A）（一）cRNA的合成及病毒基因組復(fù)制,（A）（一）cRNA是合成子代病毒基因組的模板,可在感染的宿主細(xì)胞內(nèi)發(fā)現(xiàn),它是病毒RNA的*轉(zhuǎn)錄物,5’末端是pppA,3’端沒(méi)有PolyA尾.流感病毒mRNA的合成在無(wú)病毒蛋白質(zhì)合成的情況下即可進(jìn)行,而（A）（一）cRNA不同,必須在有功能性病毒蛋白合成后才能進(jìn)行,因此其合成出現(xiàn)的時(shí)間比mRNA晚.一般認(rèn)為合成（A）（一）cRNA所需要的酶也是病毒聚合酶復(fù)合體,但病毒的某些蛋白質(zhì)（如NS1、NS2和M2）也參與這一轉(zhuǎn)錄過(guò)程.其轉(zhuǎn)錄的特點(diǎn)是不需要引物即可起始；轉(zhuǎn)錄時(shí)由于病毒蛋白質(zhì)的參與,能通過(guò)模板上的PolyU區(qū)到達(dá)5’末端.病毒聚合酶復(fù)合體中每種成分在轉(zhuǎn)錄過(guò)程中的作用還不十分清楚.流感病毒8個(gè)片段或7個(gè)片段的末端序列都相同,因此轉(zhuǎn)錄酶識(shí)別每個(gè)片段的機(jī)會(huì)是均等的,這樣每個(gè)片段轉(zhuǎn)錄（A）（一）cRNA率都相同.（A）（一）cRNA合成后可作為模板,在轉(zhuǎn)錄酶復(fù)合體的催化下忠實(shí)地轉(zhuǎn)錄出子代病毒RNA.
RNA合成的調(diào)節(jié),在流感病毒感染過(guò)程中,三種病毒RNA［mRNA、（A）（一）cRNA和vRNA］的合成速度受到某種機(jī)制的調(diào)節(jié).感染后zui先合成的是mRNA,幾乎在感染后馬上就能檢測(cè)到,因?yàn)閙RNA的合成只需要病毒多聚酶復(fù)合體及宿主mRNA的帽狀結(jié)構(gòu),不需要其它的病毒蛋白質(zhì)的協(xié)助.mRNA的合成在感染后2小時(shí)可達(dá)到高峰.在檢測(cè)到mRNA后很快即可檢測(cè)到（A）（一）cRNA,不過(guò)其合成高峰出現(xiàn)的時(shí)間可能比mRNA的還早.（A）（一）cRNA合成后很快復(fù)制出vRNA.
（3）病毒的增殖、吸附、穿膜和脫殼
〖HT5SS〗流感病毒與其它病毒一樣,感染的*步是病毒與細(xì)胞上的特異受體相互作用,使病毒吸附于細(xì)胞表面.流感病毒的受體結(jié)合位點(diǎn)位于HA頭部頂端,細(xì)胞受體是位于細(xì)胞膜糖蛋白或糖脂鏈末端的唾液酸.吸附后病毒粒子經(jīng)吞飲作用進(jìn)入細(xì)胞漿,與酸性溶酶體發(fā)生融合,這樣可使流感病毒周圍的pH下降到50.在這種酸性環(huán)境中,HA的構(gòu)型發(fā)生很大變化,使HA2的氨基端游離出來(lái)并插入吞噬泡膜的脂質(zhì)雙層,促使病毒囊膜與吞噬泡膜融合并破裂,zui后病毒核衣殼釋放到細(xì)胞漿內(nèi).病毒基因組的復(fù)制及其它成分的合成,流感病毒基因組為負(fù)鏈RNA,就是說(shuō)病毒基因組RNA不能作為模板翻譯蛋白質(zhì),必須首先合成mRNA才能進(jìn)行蛋白質(zhì)的合成.因此病毒脫去囊膜后其核酸片段進(jìn)入宿主細(xì)胞核,在病毒本身攜帶的聚合酶復(fù)合體催化下,以宿主細(xì)胞mRNA5’端序列作引物開(kāi)始初級(jí)轉(zhuǎn)錄,即產(chǎn)生mRNA.產(chǎn)生的病毒mRNA進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)用于翻譯病毒蛋白質(zhì).在感染的初期,產(chǎn)生的蛋白質(zhì)主要是NP和NS1,這時(shí)宿主細(xì)胞mRNA的翻譯被阻斷,新合成的NP和NS1又進(jìn)入細(xì)胞核,當(dāng)在核內(nèi)聚集到一定濃度后,使病毒mRNA的合成速度下降,開(kāi)始A（一）cRNA和vRNA的合成.新合成的vRNA在核內(nèi)與NP組成復(fù)合體,又可作為模板轉(zhuǎn)錄病毒mRNA.流感病毒的糖成分主要存在于囊膜上,是糖蛋白和糖脂的組分.糖脂成分來(lái)源于宿主細(xì)胞,糖蛋白中的寡糖側(cè)鏈由宿主細(xì)胞的轉(zhuǎn)移酶合成.病毒囊膜的類脂成分也來(lái)源于宿主細(xì)胞膜.病毒粒子的裝配,有關(guān)流感病毒粒子的詳細(xì)裝配過(guò)程目前還不清楚.一般認(rèn)為NP在細(xì)胞漿合成首先以游離狀態(tài)存在,但很快進(jìn)入細(xì)胞核與vRNA結(jié)合形成核殼體.zui近研究表明,M1在細(xì)胞核內(nèi)聚集到一定程度可促使核殼體從細(xì)胞核進(jìn)入細(xì)胞質(zhì).基因組片段被NP包圍后可形成一種串聯(lián)結(jié)構(gòu),但其形成機(jī)制還不清楚,因?yàn)槊恳黄蔚哪┒诵蛄卸枷嗤?在不同片段之間很難找到配對(duì)序列.有人認(rèn)為NP之間的相互作用可將它們聯(lián)在一起,但是還沒(méi)有直接證據(jù).基質(zhì)蛋白（M1）合成后到達(dá)細(xì)胞膜,緊貼在細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)面,在此處的胞膜上有HA和NA形成的纖突.核衣殼形成后移向這一區(qū)域準(zhǔn)備出芽.在每一個(gè)感染性病毒粒子中都含有8個(gè)或7個(gè)不同的基因組片段,在病毒裝配過(guò)程中如何只包裝8個(gè)或7個(gè)不同的片段而不出現(xiàn)差錯(cuò),目前還是一個(gè)懸而未決的問(wèn)題.病毒的出芽和釋放,M1合成后到達(dá)細(xì)胞膜,與HA、NA或M2的胞漿域之間相互作用可能是病毒出芽的信號(hào).病毒釋放過(guò)程中NA起很重要的作用.NA可去掉病毒囊膜上的神經(jīng)氨酸,避免子代病毒在細(xì)胞膜上聚集.病毒成熟的zui后一步是靠宿主的蛋白酶將HA裂解為HA1和HA2,使病毒粒子具有感染性.
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