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大鼠芳香化酶(Aromatase)試劑盒

2011-12-6  閱讀(1551)

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提  供  商 上海勁馬實驗設備有限公司 資料大小 133.9KB
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大鼠芳香化酶( Aromatase)酶聯(lián)免疫分析
 
試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍:                                                           96T
8.0 IU/L – 240 IU/L
使用目的:
本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關液體樣本中芳香化酶( Aromatase)含量。實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠芳香化酶( Aromatase)水平。用純化的大鼠芳香化酶( Aromatase)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入芳香化酶( Aromatase),再與 HRP標記的芳香化酶( Aromatase)抗體結合,形成抗體 -抗原 -酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物 TMB顯色。 TMBHRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的芳香化酶( Aromatase)呈正相關。用酶標儀在 450nm波長下測定吸光度( OD值),通過標準曲線計算樣品中大鼠芳香化酶( Aromatase)濃度。試劑盒組成

1
30倍濃縮洗滌液
20ml×1
7
終止液
6ml×1
2
酶標試劑
6ml×1
8
標準品( 480 IU/L
0.5ml×1
3
酶標包被板
12孔 × 8
9
標準品稀釋液
1.5ml×1
4
樣品稀釋液
6ml×1
10
說明書
1
5
顯色劑 A
6ml×1
11
封板膜
2
6
顯色劑 B
6ml×1/
12
密封袋
1

標本要求
1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于 -20℃保存,但應避免反復凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,因 NaN3抑制辣根過氧化物酶的( HRP)活性。操作步驟
1.標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
2.加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、
待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50µl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl,然后再加待測樣品 10µl(樣品zui終稀釋度為 5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3.溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 3 0分鐘。
4.配液:將 30倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30倍稀釋后備用
5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30秒后棄去,如此重復 5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶標試劑 50µl,空白孔除外。
7.溫育:操作同 3
8.洗滌:操作同 5。
9.顯色:每孔先加入顯色劑 A50µl,再加入顯色劑 B50µl,輕輕震蕩混勻, 37℃避光顯色15分鐘.
10.終止:每孔加終止液 50µl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11.測定:以空白空調零, 450nm波長依序測量各孔的吸光度( OD值)。測定應在加終止
 

240IU/L
5號標準品
150µl的原倍標準品加入 150µl標準品稀釋液
120IU/L
4號標準品
150µl5號標準品加入 150µl標準品稀釋液
60IU/L
3號標準品
150µl4號標準品加入 150µl標準品稀釋液
30IU/L
2號標準品
150µl3號標準品加入 150µl標準品稀釋液
15IU/L
1號標準品
150µl2號標準品加入 150µl標準品稀釋液

液后 15分鐘以內進行。操作程序總結:
計算
以標準物的濃度為橫坐標, OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的 OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與 OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的 OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。注意事項
 
1           試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
2           濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
3           各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在 5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。
4           請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本 OD值大于標準品孔*孔的 OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數( n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(×n×5)。
5           封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6           底物請避光保存。
7           嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準 .
8           所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9           本試劑不同批號組分不得混用。保存條件及有效期
10       2-8℃。
11       6個月

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