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人ELISA試劑盒血清是最-常用的標(biāo)本，血漿一般可視為與血清同等的標(biāo)本，標(biāo)本引起的假陽性和假陰性結(jié)果主要由干擾性物質(zhì)影響所致，分為內(nèi)源性物質(zhì)和外源性物質(zhì)兩種：
一、內(nèi)源性物質(zhì)
常見的干擾物質(zhì)有：類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、嗜異性抗體、嗜靶抗原自身抗體、醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠Ig (s)抗體、交叉反應(yīng)物質(zhì)和其它物質(zhì)等。
1.類風(fēng)濕因子：
人血清中IgM、IgG型類風(fēng)濕因子(RF)可以與ELISA系統(tǒng)中的捕獲抗體及酶標(biāo)記二抗的FC段直接結(jié)合，從而導(dǎo)致假陽性。
解決辦法：
(1)用F(ab)2替代完整的IgG；
(2)標(biāo)本用聯(lián)有熱變性(63℃，10 min)IgG的固相吸附劑處理(將熱變性IgG加入到標(biāo)本稀釋液中同樣有效)。
2.補(bǔ)體：
ELISA系統(tǒng)中固相一抗和標(biāo)記二抗過程中，抗體分子發(fā)生變構(gòu)，其FC段的補(bǔ)體C1q分子結(jié)合位點(diǎn)被暴露出來，使C1q可以將二者連接起來，從而造成假陽性。
解決辦法：
(1)用EDTA稀釋標(biāo)本；
(2)用53℃，10 min或56℃，30 min加熱血清使C1q滅活。
3.嗜異性抗體：
人類血清中含有能與嚙齒類動(dòng)物(如鼠等)Ig(s)結(jié)合的天然嗜異性抗體，可將ELISA系統(tǒng)中一抗和二抗連接起來，也能造成假陽性。
解決辦法：可在標(biāo)本稀釋液中加入過量的動(dòng)物Ig(s)，但加入量不足或亞類不同時(shí)無效。
4.嗜靶抗原的自身抗體：
抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素等嗜靶抗原的自身抗體，有時(shí)能與靶抗原結(jié)合形成復(fù)合物，在ELISA方法中均可干擾抗原抗體測(cè)定結(jié)果。
解決辦法：測(cè)定前需用理化方法將其解離后再測(cè)定。
5.醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠Ig(s)抗體：
人ELISA試劑盒臨床開展的用鼠源性CD3等單克隆抗體治療，用放射性同位素標(biāo)記鼠源性抗體的影像診斷及靶向治療等新技術(shù)，均有可能使這些病人體內(nèi)產(chǎn)生抗鼠抗體；被鼠等嚙齒類動(dòng)物咬傷的病人體內(nèi)也可以產(chǎn)生抗鼠Ig(s)抗體。這些病人ELISA測(cè)定時(shí)均可產(chǎn)生假陽性。
解決辦法：測(cè)定抗原時(shí)，在標(biāo)本中加入足量的正常鼠Ig(s)。
6.標(biāo)本中其它成分的影響血清脂質(zhì)過高、膽-紅素、血紅蛋白及血液粘度過大等，均ELISA測(cè)定結(jié)果產(chǎn)生干擾作用。
二、外源性物質(zhì)
外源性物質(zhì)常常是由用ELISA測(cè)定的血標(biāo)本的采集、貯存不當(dāng)?shù)仍驅(qū)е?。如?biāo)本溶血、標(biāo)本被細(xì)菌污染、標(biāo)本貯存過久、標(biāo)本凝集不全和采血管中添加物等影響。
1.標(biāo)本溶血：
由于各種人為原因引起的標(biāo)本溶血，均可因紅細(xì)胞破壞溶解時(shí)釋放出大量具有過氧化物酶活性的血紅蛋白，在以辣根過氧化物酶為標(biāo)記的ELISA測(cè)定中，會(huì)導(dǎo)致非特異性顯色，干擾測(cè)定結(jié)果。故標(biāo)本采集時(shí)必須注意避免溶血。
2.標(biāo)本受細(xì)菌污染：
因菌體中可能含有內(nèi)源性辣根過氧化物酶，因此，被細(xì)菌污染的標(biāo)本同溶血標(biāo)本一樣，產(chǎn)生非特異性顯色而干擾測(cè)定結(jié)果。
3.標(biāo)本保存不當(dāng)：
在冰箱中保存過久的標(biāo)本，血清中IgG可聚合成多聚體、AFP可形成二聚體，在間接法ELISA測(cè)定中會(huì)導(dǎo)致本底過深、甚至造成假陽性；標(biāo)本放置時(shí)間過長(zhǎng)(如一天以上)，有時(shí)抗原或抗體免疫活性減弱，亦可出現(xiàn)假陰性。
解決辦法：
(1)ELISA測(cè)定的血清標(biāo)本宜為新鮮采集；
(2)如不能立即測(cè)定，5天內(nèi)測(cè)定的血清標(biāo)本可存放于4℃，1周后測(cè)定的血清標(biāo)本應(yīng)低溫凍存；
(3)凍存后融解的標(biāo)本，蛋白質(zhì)局部濃縮分布不均，應(yīng)充分混合后再測(cè)定(混勻時(shí)不可強(qiáng)烈振蕩)。
4.標(biāo)本凝集不全：
在沒有促凝劑和抗凝劑存在的情況下，正常血液采集后1/2~2h開始凝固，18~24h凝固。臨床檢驗(yàn)工作中，有時(shí)為爭(zhēng)取時(shí)間快速檢測(cè)，常在血液還未開始凝固時(shí)即強(qiáng)行離心分離血清，此時(shí)的血清中仍殘留部分纖維蛋白原，在ELISA測(cè)定過程中可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊，易造成假陽性結(jié)果。
解決辦法：血液標(biāo)本采集后必須使其充分凝固后再分離血清，或標(biāo)本采集時(shí)用帶分離膠的采血管或于采血管中加入適當(dāng)?shù)拇倌齽?br />
5.人ELISA試劑盒標(biāo)本管中添加物質(zhì)的影響：
抗凝劑(如肝素，EDTA)、酶抑制劑(如NaN3可抑制ELISA系統(tǒng)中辣根過氧化物酶活性)及快速分離血清的分離膠等均對(duì)ELISA測(cè)定有一定干擾作用。
通過以上的分析和總結(jié)，從標(biāo)本因素進(jìn)行分析，并采取相應(yīng)措施排除干擾，從而確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
