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ELISA實驗中樣本的收集和運輸

2023-5-30  閱讀(1111)

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酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)可以用于:

(1)檢測大分子抗原和特異性抗體等;

(2)具有快速、靈敏、簡便、載體易于標準化等優(yōu)點。

ELISA的基礎是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性,酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性,又保留酶的活性。 ELISA的樣本收集與運輸: 利用ELISA進行檢驗常見的樣本一般包括血液(指血,靜脈血),尿,糞便,腦脊液,胸腹水,前列腺液,分泌物等,這些樣本收集的時間、方法和保存都有一定的要求。 ELISA實驗中的血清需采用血管收集血液,室溫血液自然凝固30分鐘,1000xg離心15分鐘左右,收集上清,分裝后,標好號,-20°C-80°C保存。運輸是用干冰。(注:一個樣本檢測一個指標至少需要40ul血清,您是一個樣本檢測4個指標,至少需要160ul血清,多準備一些。) 光鏡:肝臟組織4%多聚甲醛固定后密封,4度或者常溫保存即可,運輸時用冰袋。 電鏡:一定要是新鮮的組織加到新鮮配置的2.5%戊二醛中固定后,4度保存,電鏡所需的組織塊不需要太大,米粒大小即可,運輸時用冰袋即可。 免疫組化:取適當?shù)慕M織放于4%的多聚甲醛中固定,密封,避光,四度或常溫保存,運輸時加冰袋即可。 RT-PCRWB:取下肝臟組織,置于-80或者液氮中保存,運輸時用泡沫保溫盒加干冰。 注意事項: 血清標本宜在新鮮時檢測。如有細菌污染,菌體中可能含有內源性HRP,也會產生假陽性反應。如在冰箱中保存過久,其中的可發(fā)生聚合,在間接法ELISA中可使本底加深。一般說來,在5天內測定的血清標本可放置于4℃,超過一周測定的需低溫冰存。凍結血清融解后,蛋白質局部濃縮,分布不均,應充分混勻宜輕緩,避免氣泡,可上下顛倒混和,不要在混勻器上強烈振蕩?;鞚峄蛴谐恋淼难鍢吮緫入x心或過濾,澄清后再檢測。反復凍融會使抗體效價跌落,所以測抗體的血清標本如需保存作多次檢測,宜少量分裝冰存。保存血清自采集時就應注意無菌操作,也可加入適當防腐劑。 按試劑盒說明書的要求準備實驗中需用的試劑。ELISA中用的蒸餾水或去離子水,包括用于洗滌的,應為新鮮的和高質量的。自配的緩沖液應用pH計測量較正。從冰箱中取出的試驗用試劑應待溫度與室溫平衡后使用。試劑盒中本次試驗不需用的部分應及時放回冰箱保存。


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