人CD4分子ELISA檢測試劑盒試驗原理：
CD4試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知CD4濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測。先將CD4和標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結合的酶結合物，然后加入底物A、B，和酶結合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中CD4的濃度呈比例關系。
自備材料
．蒸餾水。
2．加樣器：5ul、0ul、50ul、00ul、200ul、500ul、000ul。
3．振蕩器及磁力攪拌器等。
安全性
．避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。
2．實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
3．不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。
操作注意事項
．試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。
2．實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
3．不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
4．使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
5．使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6．洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
7．底物A應揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
8．加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
9．按照人CD4分子ELISA檢測試劑盒說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
樣品收集、處理及保存方法
、血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，000×g離心0分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2、血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。000×g離心30分鐘去除顆粒。
3、細胞上清液---000×g離心0分鐘去除顆粒和聚合物。
4、組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。000×g離心0分鐘，取上清液
5、保存------如果樣品不立即使用，應將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
試劑的準備
標準品：標準品的系列稀釋應在實驗時準備，不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。
2．洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。

人CD4分子ELISA檢測試劑盒操作步驟
．使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。
2．根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液：稀釋后加入50ul于反應孔內(nèi)。
3．加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內(nèi)。立即加入50ul的標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育小時。
4．甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
5．每孔加入60ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
6．甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
7．每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育0分鐘。避免光照。
8．取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應立即測定結果。
在450nm波長處測定各孔的OD值。