大鼠心肌營養(yǎng)素(CT)elisa試劑盒使用說明書
檢測原理:
本試劑盒采用雙抗體夾心法：抗大鼠心肌營養(yǎng)素(CT)單抗包被于酶標(biāo)板上，標(biāo)本和標(biāo)準(zhǔn)品中的心肌營養(yǎng)素(CT)會與單抗結(jié)合，游離的成份被洗去。加入酶標(biāo)抗體，抗大鼠心肌營養(yǎng)素(CT)抗體與結(jié)合在單抗上的大鼠心肌營養(yǎng)素(CT)結(jié)合而形成免疫復(fù)合物，游離的成分被洗去。加入顯色底物，若反應(yīng)孔中有心肌營養(yǎng)素(CT)，辣根過氧化物酶會使無色的顯色劑現(xiàn)藍(lán)色，加終止液變黃。在450nm處測OD值，心肌營養(yǎng)素(CT)濃度與OD450值之間呈正比，可通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中的心肌營養(yǎng)素(CT)濃度。
操作步驟:
實(shí)驗(yàn)開始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫；試劑或樣品配制時，均需充分混勻，并盡量避免起泡。
. 加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔?？瞻卓准訕?biāo)準(zhǔn)品&樣品稀釋液 00μL，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品 00μL，注意不要有氣泡，加樣時將樣品加于酶標(biāo)板底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。給酶標(biāo)板覆膜，37℃孵育 90 分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2. 棄去液體，甩干，不用洗滌。每個孔中加入化抗體工作液 00μL（在使用前5 分鐘內(nèi)配制），酶標(biāo)板加上覆膜，37℃溫育 小時。
3. 棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板 3 次，每次浸泡 -2 分鐘，大約 350μL/每孔，甩干并在吸水紙上輕拍將孔內(nèi)液體拍干。
4. 每孔加酶結(jié)合物工作液（臨用前 5 分鐘內(nèi)配制）00μL，加上覆膜，37℃溫育30 分鐘。
5. 棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5 次，方法同步驟3。
6. 每孔加底物溶液(TMB)90μL，酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光孵育5 分鐘左右（根據(jù)實(shí)際顯**況酌情縮短或延長，但不可超過30 分鐘。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)孔出現(xiàn)明顯梯度時，即可終止）。
7. 每孔加終止液 50μL，終止反應(yīng)，此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物溶液的加入順序相同。
8. 立即用酶標(biāo)儀在 450nm 波長測量各孔的光密度（OD 值）。應(yīng)提前打開酶標(biāo)儀電源，預(yù)熱儀器，設(shè)置好檢測程序。
9. 實(shí)驗(yàn)完畢后將未用完的試劑按規(guī)定的保存溫度放回冰箱保存。
注意事項(xiàng)：
◆ 仔細(xì)閱讀說明書。
◆ 檢查試劑盒標(biāo)簽上的有效期。如果超過有效期，請勿使用。
◆ 按說明書確定所有試劑齊全（數(shù)量、體積）。
◆ 標(biāo)本制備要規(guī)范，每份標(biāo)本體積要按2-3個復(fù)孔以上的量制備（貯存），盡量分裝做備份。短期內(nèi)無法實(shí)驗(yàn)者，注意低溫保存。
◆ 準(zhǔn)備好所有實(shí)驗(yàn)額外所需物品，（比如移液器，試管，清洗器，酶標(biāo)儀）。
◆ 按說明書將所用試劑平衡至室溫，根據(jù)檢測標(biāo)本數(shù)量確定所需試劑的量。
◆ 檢查試劑盒內(nèi)每種試劑的貯存條件，保證所有試劑均按照試劑盒內(nèi)說明書的條件存儲。
◆ 檢查不穩(wěn)定或者變質(zhì)的試劑溶液（比如沉淀或變色）。有些試劑，比如標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液或者檢測稀釋液，可能在設(shè)計時就含有沉淀物。所有試劑在滴入酶標(biāo)板之前，必需充分混勻。而由于沉淀物的特性，在加入酶標(biāo)板之前，必需不停攪拌。
◆ 保證充分的孵育時間和溫度。
◆ 切勿使用不同批號的試劑取代現(xiàn)有試劑或混合現(xiàn)有試劑。
◆ 在混合或溶解蛋白溶液時，避免泡沫產(chǎn)生。
◆ 在實(shí)驗(yàn)開始之前，安排好實(shí)驗(yàn)流程。
◆ 在實(shí)驗(yàn)開始之前，清潔工作臺。
◆ 若有問題，應(yīng)與我公司或代理商的
結(jié)果判斷:
. 每個標(biāo)準(zhǔn)品的OD值減去空白孔的OD值后作圖，如設(shè)置復(fù)孔，則應(yīng)取其平均值計算。以標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線。亦可以O(shè)D值為橫坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為縱坐標(biāo)，繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線。
2. 使用專業(yè)的曲線制作軟件，如curve expert .3或.4，在軟件界面既可根據(jù)樣品OD值，由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度，乘以稀釋倍數(shù)；亦可將樣品的OD值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線的擬合方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。
3. 若樣品OD值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線上限，應(yīng)適當(dāng)稀釋后重測，計算濃度時應(yīng)乘以稀釋倍數(shù)。
