學習elisa試劑盒的判定方法和檢測說明

時間：2016/7/15閱讀：1019

　　elisa試劑盒判定結(jié)果方法

　　.定量測定結(jié)果按照尺度曲線計較樣品中待測物的含量。

　　2.目測定性法：參加底物經(jīng)酶解和終止反響后，肉眼察看陽性孔顏色明顯深于(競爭法例淺于)陰性比較；與陰性比較的顏色靠近者，斷定為陰性。

　　3.以樣品孔的OD值大于陰性比較OD值+2～3SD，作為陽性結(jié)果的閾值。

　　4.以P／N值(陽性孔OD值／陰性孔OD值)大于或即是2.為陽性；P／N值小于2.，但大于.5為可疑；P／N小于.5為陰性。

　　elisa試劑盒檢測說明

　　、試劑

　　()5%與2.5%PEG用0.02mol/LpH7.4PBS配制；

　　(2)牛血清白蛋白(BSA)緩沖液：用0.05mol/LpH7.4PBS配制。含0.0mol/LEDTA、0.%硫柳汞、0.05%Tween20及4%BSA；

　　(3)HRP-SPA用改良過碘酸鈉法將SPA與辣根過氧化物酶(HRP)制成結(jié)合物，zui適工作濃度以方陣法滴定；

　　(4)熱聚合人IgG：人IgG0mg/ml，63℃加熱20min制成。

　　2、把持步伐

　　()用PBS稀釋SPA成5Ps/ml，包被聚苯乙烯反應(yīng)板微孔，每孔0.ml( 比力孔不包被)，置4℃ 過夜后洗滌3次備用；

　　(2)待測血清0.05ml加PBS0.5ml和5%PEG0.2ml混勻，4℃ 過夜后600r/min離心20min，棄上清，沉淀用2.5%PEG洗2次，加入PBS0.2ml和BSA緩沖液0.2ml，混勻，置37℃水浴30min，擺蕩，使*溶解；

　　(3)將已溶解的待測血清沉淀物加至上述包被孔和比力孔中，置37℃60min，洗3次；各孔加底物溶液(OPD—H202)0.ml，37℃20min使呈色。每孔加2mol/LH2S04滴終止反應(yīng)。置酶標儀492nm測各孔吸光值；

　　(4) 標準曲線制備：取正常人血清0.2ml，加熱聚合人IsC(20ug/ml)0.2ml，再加PBS0.4ml和5%PEG0.8ml，置4℃ 過夜。同時做不加熱聚合人耽的正常血清比力，以排除血清中干擾因素。沉淀清洗同標本把持。用稀釋的BSA緩沖液(加等量0.0mol/LpH7.4PBS).6ml溶解并稀釋成20、60、30、5、7.5ug/ml，與待測血清同法把持，制成工作標準曲線；

　　(5)結(jié)果判斷：從待測血清吸光度值查標準曲線，即可換算成相當于熱聚合人IgG的CIC含量(ug/ml)。以高于正常比力X+2S，即大于28.4ug/ml為陽性。

　　3、注意事項

　　()熱聚合人IgC應(yīng)分裝貯存于-20℃，不宜反復凍融，否則易解聚；

　　(2)PEG的濃度影響CIC沉淀量，須嚴格配制。

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