實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細胞簡介：

小鼠臍動脈平滑肌分離自臍帶組織；它是臍動脈的重要結(jié)構(gòu)組成細胞之一，在機體的正常生理過程中發(fā)揮著重要作用。臍帶是哺乳類的連接胎兒和胎盤的管狀結(jié)構(gòu)，臍帶中通過尿膜的血管即臍動脈和臍靜脈，卵黃囊的血管即臍腸系膜動脈及臍腸系膜靜脈。在子宮中，子宮動脈在胎盤的母體部分出的毛細血管，與胎盤的子體部胎兒毛細血管靠近，在此處母體和胎兒的血液間進行CO2和O2，代謝產(chǎn)物即代謝廢物和營養(yǎng)物質(zhì)的交換。臍動脈將胎兒產(chǎn)生的廢物運送至胎盤，臍靜脈將O2和營養(yǎng)物質(zhì)從胎盤運送給胎兒。由于臍帶是分娩過程中的廢棄物，同時從臍帶中分離臍靜動平滑肌細胞方法相對成熟，使得體外培養(yǎng)的臍動脈平滑肌細胞作為研究血管的模型細胞。臍動脈平滑肌細胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見細胞貼壁伸展，細胞形態(tài)大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細胞匯合，多數(shù)細胞伸展呈長梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長，高低起伏；細胞密度低時，常交織成網(wǎng)狀；密度高時，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細胞生長較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長特點。

方法簡介：

實驗室分離的小鼠臍動脈平滑肌采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

實驗室分離的小鼠臍動脈平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)：成纖維細胞樣

傳代特性：可傳2-3代左右

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

小鼠臍動脈平滑肌體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠Ⅳ型膠原(Col Ⅳ)檢測試劑盒 ，英文名： Col Ⅳ ELISA Kit

Mouse caspase 3 (Casp-3) ELISA Kit 小鼠胱天蛋白酶3(Casp-3)檢測試劑盒

MouseKidneyinjurymolecule1,Kim-1ELISAKit 小鼠腎損傷分子1(Kim-1)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHumahrombinactivatablefibrinolysisinhibitor,TAFIELISAKit人纖溶抑制因子/激活的纖溶抑制物

通用型羊約尼氏病/副桿菌(Mycobacteriumparatuberculosis /Johne’sdisease)試劑盒20次

ELISAKiti-PTH大鼠全段甲狀旁腺素

ICAM1重組大鼠 ICAM-1 / CD54 蛋白 Protein

HisX6 聚組標(biāo)簽蛋白 0.5mgHisX6 聚組標(biāo)簽蛋白

CA5A重組人 CA5A / CA-VA 蛋白 Protein

GBP2 Protein Human 重組人 GBP-2 / GBP2 蛋白

ERBB2 Protein Mouse 重組小鼠 HER2 / ErbB2 / CD340 蛋白

HisX6 聚組標(biāo)簽蛋白 0.5mgHisX6 聚組標(biāo)簽蛋白

GBP2 Protein Human 重組人 GBP-2 / GBP2 蛋白

ICAM1重組大鼠 ICAM-1 / CD54 蛋白 Protein

ERBB2 Protein Mouse 重組小鼠 HER2 / ErbB2 / CD340 蛋白

CA5A重組人 CA5A / CA-VA 蛋白 Protein

小鼠白介素9(IL-9)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human hyaluronidase (HAase) ELISA Kit 人透明質(zhì)酸酶(HAase)檢測試劑盒

HumanypsinELISAKit 人(ypsin)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanCalcitonin,CT檢測試劑盒人降鈣素(CT)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

中性紅復(fù)染試劑盒50次

Humansolubleprotein185,sp185/HER-2ELISAKit人可溶性蛋白185(sp185/HER-2)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

小鼠臍動脈平滑肌細胞兔子Ⅱ(FⅡ)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔子C反應(yīng)蛋白(CRP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔子內(nèi)皮型合成酶3(eNOS-3)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔子酯轉(zhuǎn)移蛋白(CETP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T