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上海一研生物科技有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第11年

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測(cè)定氨基酸含量

時(shí)間:2016/2/26閱讀:1344
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    水溶液中的氨基酸為兼性離子,因而不能直接用堿滴定氨基酸的羧基。甲醛可與氨基酸上的—N+H3結(jié)合,形成—NH—CH2OH、—N(CH2—OH)2 等羥甲基衍生物,使N+H3上的H+游離出來,這樣就可以用堿滴定N+H3放出H +,測(cè)出氨基氮,從而計(jì)算氨基酸的含量。ELISA試劑盒

    若樣品中只含有單一的已知氨基酸,則可由此法滴定的結(jié)果算出氨基酸的含量。若樣品中含有多種氨基酸(如蛋白質(zhì)水解液),測(cè)不能由此法算出氨基酸的含量。 

    與甲醛作用后,生成的化合物不穩(wěn)定,導(dǎo)致滴定后結(jié)果偏低;含酚基結(jié)構(gòu),導(dǎo)致滴定結(jié)果偏高。 

測(cè)定氨基酸含量的材料、試劑與器具 

(一)試劑 

1、0.5%酒精溶液 

稱0.5g溶于100ml60%酒精中。 

2、0.05%溴藍(lán)溶液 

取0.05溴麝行草酚藍(lán)溶于100ml 20%乙醇溶液中。 

3、1%溶液 

取1g溶于100ml蒸餾水。 ELISA試劑盒

4、標(biāo)準(zhǔn)0.100mol/L 氫氧化鈉溶液 

5、中性甲本醛溶液 

    取50ml,加0.5%指示劑約3ml,滴加0.1mol/LnaOH溶液,使溶液呈微粉紅色,臨用前中和。 

(二)實(shí)驗(yàn)器具 

1、錐形瓶 2、堿式滴定管 

3、 移液管洗耳球 4、天平 

5、容量瓶 6、試劑瓶 

7、量筒 8、玻棒與燒杯 

    注意事項(xiàng) :利用甲醛滴淀法可以用來測(cè)定蛋白質(zhì)的水解程度。隨著蛋白質(zhì)水解度的增加,滴定值也增加,當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)水解完成后,滴定值不再增加。ELISA試劑盒

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