商品詳情：
生長特性 貼壁細胞

細胞形態(tài) 上皮細胞樣

凍存條件

凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO

溫度：液氮

培養(yǎng)方案A（默認）

生長培養(yǎng)基:

Ham's F-12K＋10% FBS＋1% P/S

培養(yǎng)條件:

氣相：空氣，95%；CO2，5%, 溫度：37℃

推薦傳代比例 1:3-1:4

推薦換液頻率 2-3次/周

參考資料(來源文獻)

背景描述 A549細胞是由D·J·Griad通過肺癌組織移植培養(yǎng)建系，源自于一位58歲白人男性；A549能通過胞苷二磷酸堿途徑合成含有高含量不飽和脂肪酸的磷脂。

年齡（性別） 男性；58歲

組織來源 肺癌

細胞類型 腫瘤細胞

腫瘤類型 肺癌細胞

生物安全等級 BSL-1

倍增時間 ~22 hours

保藏機構(gòu) ATCC; CCL-185 ATCC; CRM-CCL-185 ATCC; CRL-7909BCRC; 60074 BCRJ; 0033 DSMZ; ACC-107 ECACC; 86012804

商品屬性：

細胞系培養(yǎng)步驟：

細胞系培養(yǎng)?的步驟主要包括細胞復(fù)蘇、細胞傳代和細胞凍存。

細胞復(fù)蘇?：

將凍存細胞從液氮中取出后，在37℃水浴鍋內(nèi)不斷搖動促進其融化。

將融化的細胞移入離心管中，加入37℃預(yù)熱的DMEM培養(yǎng)基中（其中胎牛血清約為10%），輕輕吹勻，離心，500g離心2min，棄上清液。加入DMEM培養(yǎng)基清洗，棄上清液。加入DMEM培養(yǎng)基，輕輕吹打混勻，制成細胞懸液，接種于培養(yǎng)皿/瓶中，在含5% CO2的細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

細胞傳代?：

當細胞密度達到80%~90%時，去掉培養(yǎng)基，用1X PBS清洗2次。

加入進行消化，放入細胞培養(yǎng)箱中約2-3min。

加入適量DME培養(yǎng)基終止消化，轉(zhuǎn)移至離心管后500g離心2min，棄上清液，再加入DMEM培養(yǎng)基清洗，棄上清液。加入DMEM培養(yǎng)基，輕輕吹打混勻，吸取10微升進行計數(shù)，然后按照所需細胞量在含5% CO2的細胞培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。

?細胞凍存?：

當細胞密度達到80%~90%時，去掉培養(yǎng)基，用1X PBS清洗2次。

加入行消化，放入細胞培養(yǎng)箱中約2-3min。

加入DMEM培養(yǎng)基終止消化，轉(zhuǎn)移至離心管后500g離心2min，棄上清液，再加入DMEM培養(yǎng)基清洗，棄上清液。

這些步驟確保了細胞的生長和繁殖能夠在體外環(huán)境中得到有效的維持和擴展，為科學(xué)研究提供了大量的細胞樣本?。

?細胞系培養(yǎng)?的步驟主要包括細胞復(fù)蘇、細胞傳代和細胞凍存。

細胞復(fù)蘇?：

將凍存細胞從液氮中取出后，在37℃水浴鍋內(nèi)不斷搖動促進其融化。

將融化的細胞移入離心管中，加入37℃預(yù)熱的DMEM培養(yǎng)基中（其中胎牛血清約為10%），輕輕吹勻，離心，500g離心2min，棄上清液。加入DMEM培養(yǎng)基清洗，棄上清液。加入DMEM培養(yǎng)基，輕輕吹打混勻，制成細胞懸液，接種于培養(yǎng)皿/瓶中，在含5% CO2的細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

細胞傳代?：

當細胞密度達到80%~90%時，去掉培養(yǎng)基，用1X PBS清洗2次。

加入進行消化，放入細胞培養(yǎng)箱中約2-3min。

加入適量DMEM培養(yǎng)基終止消化，轉(zhuǎn)移至離心管后500g離心2min，棄上清液，再加入DMEM培養(yǎng)基清洗，棄上清液。加入DMEM培養(yǎng)基，輕輕吹打混勻，吸取10微升進行計數(shù)，然后按照所需細胞量在含5% CO2的細胞培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。

細胞凍存?：

當細胞密度達到80%~90%時，去掉培養(yǎng)基，用1X PBS清洗2次。

加入進行消化，放入細胞培養(yǎng)箱中約2-3min。

加入DMEM培養(yǎng)基終止消化，轉(zhuǎn)移至離心管后500g離心2min，棄上清液，再加入DMEM培養(yǎng)基清洗，棄上清液。

這些步驟確保了細胞的生長和繁殖能夠在體外環(huán)境中得到有效的維持和擴展，為科學(xué)研究提供了大量的細胞樣本?

公司正在出售的產(chǎn)品：

細胞接收后的處理：

1）A549人非小細胞肺癌細胞收到細胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。

2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據(jù)

3）貼壁細胞：細胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的培養(yǎng)基6-8mL，放到細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細胞生長密度達70%-80%以上，可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。

4）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。  收到細胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。                      

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1） 準備MEM培養(yǎng)基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。