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小鼠α(AMS)elisa試劑盒使用說明書

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小鼠α(AMS)elisa試劑盒實驗原理:
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中小鼠α(AMS)水平。 用純化的小鼠α(AMS)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入α(AMS),再與 HRP 標記的α(AMS)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的α(AMS)呈正相關。用酶標儀在 450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中小鼠α(AMS)濃度。
試劑盒組成:
1  30 倍濃縮洗滌液  20ml×1 瓶  7  終止液  6ml×1 瓶
2  酶標試劑  6ml×1 瓶  8  標準品(480µmol/L) 0.5ml×1 瓶
3  酶標包被板  12 孔×8 條  9  標準品稀釋液  1.5ml×1 瓶
4  樣品稀釋液  6ml×1 瓶  10  說明書  1 份
5  顯色劑 A 液  6ml×1 瓶  11  封板膜  2 張
6  顯色劑 B 液  6ml×1/瓶  12  密封袋  1 個
標本要求:
1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能
馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
2.不能檢測含 NaN3 的樣品,因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

計算:
以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與 OD 值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。
小鼠α(AMS)elisa試劑盒操作步驟:
1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
釋。
240µmol/L  5 號標準品  150µl 的原倍標準品加入 150µl 標準品稀釋液
120µmol/L  4 號標準品  150µl 的 5 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液
60µmol/L  3 號標準品  150µl 的 4 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液
30µmol/L  2 號標準品  150µl 的 3 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液
15µmol/L  1 號標準品  150µl 的 2 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液
2.  加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同) 、標準孔、待測樣品孔。 在酶標包被板上標準品準確加樣 50µl, 待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl,然后再加待測樣品 10µl(樣品zui終稀釋度為 5 倍) 。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3.  溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4.  配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5.  洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此
重復 5 次,拍干。
6.  加酶:每孔加入酶標試劑 50µl,空白孔除外。
7.  溫育:操作同 3。
8.  洗滌:操作同 5。
9.  顯色:每孔先加入顯色劑 A50µl,再加入顯色劑 B50µl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
10 分鐘.
10. 終止:每孔加終止液 50µl,終止反應(此時藍色立轉黃色) 。
11. 測定:以空白空調零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。測定應在加終止液后 15 分鐘以內進行。

注意事項:
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未
用完,板條應裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間
控制在 5 分鐘內,如標本數(shù)量多,使用排槍加樣。
4. 請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本 OD 值
大于標準品孔*孔的 OD 值) ,請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測定,計
算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5) 。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物請避光保存。
7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9.本試劑不同批號組分不得混用。
保存條件及有效期:
1.試劑盒保存:2-8℃。
2.小鼠α(AMS)elisa試劑盒有效期:6 個月

 

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