人輸血傳播病毒(TTV)ELISA試劑盒操作步驟：

1.取出試劑盒，室溫（20-25℃）放置30分鐘。

2.分組：取出96孔板，根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)，把剩余的板條繼續(xù)冷藏處理。分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品組（6個(gè)濃度）、空白孔、待測(cè)樣品組。

標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：準(zhǔn)備小試管6 只，依次編好號(hào)碼，先在各小試管中加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液100ul，然后取原濃度標(biāo)準(zhǔn)品100ul加入一只已編好號(hào)的試管中，充分混勻;再在該試管中取100ul 加入第二支試管中，充分混勻；再在該試管中取100ul 加入第三只試管中，充分混勻；再在該試管中取100ul 加入第四只試管中，充分混勻；再在該試管中取100ul 加入第五只試管中，充分混勻；然后在該試管中取100ul，棄掉。第六只試管作為0 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋后各管濃度分別是：1000 pg/ml,500 pg/ml,250 pg/ml, pg/ml,125pg/ml,62.5pg/ml,0 pg/ml。

注：為減少實(shí)驗(yàn)誤差，保證準(zhǔn)確性，建議設(shè)置復(fù)孔。

3.加樣：依照標(biāo)準(zhǔn)品的順序分別加入50ul的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白微孔中；空白對(duì)照孔加入50ul的蒸餾水；其余微孔中先加樣品40ul然后再加標(biāo)記的抗ACH 抗體10ul。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

4.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒后棄去，如此重復(fù)5 次，拍干。

6.加酶標(biāo)溶液：標(biāo)準(zhǔn)品組、待測(cè)樣本組各孔中加入50ul的酶標(biāo)溶液（空白對(duì)照孔除外）。

7.溫育：酶標(biāo)板用封板紙密封后，放入濕盒內(nèi)于37℃恒溫孵育1小時(shí)。

8.洗板：用稀釋后的洗滌液注滿每孔，靜置15-30s，充分清洗酶標(biāo)板5次，用吸水紙*拍干。

9.顯色：各孔加入顯色劑A液50ul后，再加入顯色劑B液50ul。

10.終止：25-37℃下避光反應(yīng)10-15分鐘，加入50ul終止液。

11.讀板：在450nm波長(zhǎng)讀取各孔的OD值。

注：讀板時(shí)必須拭干板底殘留的液體和手指痕跡，讀板時(shí)間控制在終止反應(yīng)后的30分鐘內(nèi)，以免影響準(zhǔn)確性。

人輸血傳播病毒(TTV)ELISA試劑盒數(shù)據(jù)計(jì)算

1.繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：各標(biāo)準(zhǔn)品OD值減去底色即減去空白孔OD值，以6個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品的OD值為縱坐標(biāo)y，以標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為橫坐標(biāo)x，繪制曲線圖，如圖示，并計(jì)算出回歸方程y=ax+b。

2.將待測(cè)樣品的OD值代入方程式，計(jì)算各組樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際ACH濃度。

3.敏感度：1.0 pg/ml

注意事項(xiàng)：

1.實(shí)驗(yàn)操作中必須使用一次性吸頭，避免交叉污染。

2.加樣：加樣時(shí)，要控制加樣速度，避免孔與zui后一孔間的時(shí)間間隔過大，否則將會(huì)導(dǎo)致不同的預(yù)孵育時(shí)間，從而影響實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性以及重復(fù)性。

3.孵育：嚴(yán)格按照說明書上規(guī)定的孵育時(shí)間和溫度進(jìn)行。

4.反應(yīng)時(shí)間的控制：加入底物后請(qǐng)定時(shí)觀察反應(yīng)孔的顏色變化，如果顏色較深，請(qǐng)?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)。

5.建議實(shí)驗(yàn)前預(yù)測(cè)樣品含量，如樣品濃度過高，應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋，計(jì)算結(jié)果時(shí)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

6.建議使用本試劑盒時(shí)先做預(yù)實(shí)驗(yàn)（即先做標(biāo)準(zhǔn)曲線，試用幾個(gè)標(biāo)本），如果對(duì)本試劑盒有任何疑問，可和所購經(jīng)銷商，如果因運(yùn)輸過程導(dǎo)致試劑盒失效，可要求調(diào)換，但概不承擔(dān)產(chǎn)品本身以外的任何損失。

安全性

1.避免人體直接接觸顯色劑A、B和終止液。一旦接觸到這些液體，請(qǐng)盡快用水沖洗。

2.實(shí)驗(yàn)中不要進(jìn)食、抽煙或使用化妝品。

3.不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

人輸血傳播病毒(TTV)ELISA試劑盒保存條件及有效期：

1.試劑盒保存：2-8℃

2.有效期：6個(gè)月