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僅供研究用
貨號:QYS-234045
直鏈淀粉含量試劑盒說明書
分光光度法 50 管/48 樣
直鏈淀粉含量試劑盒說明書正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義:
直鏈淀粉是D-葡萄糖基以a-(1,4)糖苷鍵連接的多糖鏈,其含量測定對于評價食品營養(yǎng)價值和調(diào)查植物體內(nèi)糖代謝都有重要意義。
測定原理:
利用 80%乙醇可以把樣品中可溶性糖與淀粉分開,直鏈淀粉與碘形成的絡合物在 620nm 下有吸收峰。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰、乙醚和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
試劑一:液體 50mL×1 瓶;4℃保存;
試劑二:乙醚 50mL×1 瓶;(自備)
試劑三:液體 50mL×1 瓶;4℃保存;
試劑四:液體 4mL×1 瓶; 4℃保存;
試劑五:液體 1mL×1 瓶;4℃保存;
直鏈淀粉含量試劑盒說明書淀粉提取:
稱取 0.01~0.02g 烘干樣本(建議稱取約 0.01g)于研缽中研碎,加入 1mL 試劑一,充分勻漿后轉(zhuǎn)移到 EP 管中,80℃水浴提取 30min,3000g,25℃離心 5min,棄上清,留沉淀,加入 1mL 試劑二(乙醚)振蕩 5min,3000g,25℃離心 5min,棄上清,留沉淀,加入 1mL 試劑三充分溶解,90℃水浴 10min,冷卻后待測。
測定步驟:
1、 分光光度計 30min 以上,調(diào)節(jié)波長至 620nm,蒸餾水調(diào)零。
測定管:在 EP 管中依次加入 100uL 樣本,70uL 試劑四,600uL 蒸餾水,10uL 試劑五,220uL蒸餾水,混勻,測定 620nm 處吸光值,記為 A 測定。
空白管:在 EP 管中依次加入 100uL 試劑三, 70uL 試劑四,600uL 蒸餾水,10uL 試劑五, 220uL 蒸餾水,混勻,測定 620nm 處吸光值,記為 A 空白。
直鏈淀粉含量計算:
標準條件下測定的回歸方程為 y=1.755x+0.0062;x 為標準品濃度(mg/mL),y 為吸光值。1、按照蛋白濃度計算
直鏈淀粉含量(mg/mg prot)=[(A 測定-A 空白-0.0062)×V1]÷1.755 ÷(V1×Cpr)=0.57×(A 測定
-A 空白-0.0062) ÷Cpr
2、按樣本干重計算
直鏈淀粉含量(mg/g 干重)= [(A 測定-A 空白-0.0062)×V1] ÷1.755÷(W×V1÷V2) =0.57×(A 測
定-A 空白-0.0062) ÷W
V1:加入反應體系中樣本體積,0.1mL;V2:加入提取液體積,1 mL;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g
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