液體樣本甘油測定試劑盒檢測原理

描述：甘油是甘油三酯的水解產(chǎn)物。脂蛋白酯酶能水解血液中的甘油三酯；胰脂酶可以水解食 物中的甘油三酯；激素敏感脂肪分解酶能水解脂肪細(xì)胞中的甘油三酯。與游離脂肪酸一樣，甘 油含量是甘油三酯水解反應(yīng)的可靠檢測指標(biāo)，但檢測更方便。本試劑盒采用甘油磷酸氧化酶法 和經(jīng)典 GPO-Trinder 酶學(xué)反應(yīng)相結(jié)合的方法，通過比色法測定液體樣本中的甘油含量。經(jīng)過優(yōu) 化后，操作步驟更加簡單，檢測線性范圍在 10-1200μmol/L，可靠性和重復(fù)性俱佳，適合生物 醫(yī)學(xué)、食品實(shí)驗(yàn)室檢測。

操作步驟：

一. 樣本處理： 酒類、飲品、清澈液體樣本：可直接進(jìn)行測定，如超過線性范圍可用蒸餾水或生理鹽水稀釋后 再測定。 培養(yǎng)液：取不含酚紅、無顏色、無血清的細(xì)胞培養(yǎng)基，如有細(xì)胞碎片應(yīng) 4oC,，12,000g 離心 5min, 取上清進(jìn)行測定。 血液：新鮮抗凝血，4oC，2,000g 離心 5min 得到血漿；非抗凝血，先 4oC 靜置 2h 得到血清后， 2000g 離心 10min,除去血細(xì)胞。將得到的血漿/血清 70oC 加熱 10 分鐘滅活內(nèi)源脂肪酶，12,000g 離心 10min ,取上清測定或-20oC 保存。 二 .工作溶液配制：按 4:1 比例，取 4 ml 試劑 R1 與 1 ml 試劑 R2 混合，立即使用或 4oC 保存 <1 天，變色棄去。 三 .標(biāo)準(zhǔn)品稀釋：用蒸餾水、生理鹽水或與樣品緩沖液一致的液體，將 4 mM 甘油標(biāo)準(zhǔn)品倍比稀 釋為 1000、500、250、125、62.5、31.25、15.625、7.8125 μmol/L，通常取其中 4~6 管即可， 注意設(shè)置 0 濃度對(duì)照反應(yīng)管。

原理：在 ATP 存在下甘油被甘油激酶磷酸化為 3-磷酸甘油，再被甘油磷酸氧化酶氧化產(chǎn)生過氧 化氫；在過氧化物酶作用下生色底物轉(zhuǎn)化為苯醌亞胺，其光密度值與甘油濃度成正比。

液體樣本甘油測定試劑盒檢測原理