(一)原理

    顯示染色體主要是顯示分裂中期細(xì)胞。因細(xì)胞分裂處于中期時(shí)，染色體的長短和大小恰到好處，是研究染色體的階段。所以，*需要獲得多量的中期分裂象；第二·人類染色體有46條，密集在細(xì)胞中，相互交錯(cuò)纏繞，必須把它們分散開，才便于觀察。

(二)提高染色體顯示的措施

1．提高細(xì)胞分裂象數(shù)

(1)刺激細(xì)胞增殖：大多數(shù)培養(yǎng)細(xì)胞群在指數(shù)增生期時(shí)，細(xì)胞分裂指數(shù)在1％～5％；其中二倍體細(xì)胞和初代培養(yǎng)細(xì)胞較低，平均1％～2％，傳代細(xì)胞系，尤以永生性轉(zhuǎn)化細(xì)胞系和腫瘤細(xì)胞系等較高，可達(dá)3％～5％。另一些如初代淋巴細(xì)胞培養(yǎng)則很少出現(xiàn)分裂，為此常采用刺激細(xì)胞增殖措施。刺激淋巴細(xì)胞增殖主要用PHA，白菜豆(phaseolus vulgaris)中提取，有商品出售，PHA分P和M兩型，M型作用較強(qiáng)。PHA特別適用于外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)，有強(qiáng)烈的刺激T淋巴細(xì)胞增殖的作用，用量每10 ml培養(yǎng)液加PHAO．2ml．

(2)阻抑中期分裂

1)秋水仙素法：處于指數(shù)增生期的培養(yǎng)細(xì)胞分裂雖然活躍、分裂象數(shù)量較多，但做分析用尚顯不足。主要原因是，分裂象雖多，但并不同步，都處于分裂各不同期，其中處于分裂中期的細(xì)胞數(shù)并不很多。應(yīng)用秋水仙素作用能顯著提高中期分裂象數(shù)(或用其衍生物秋水仙胺，秋水仙胺作用比前者強(qiáng)10倍)。秋水仙素有特異抑制紡錘絲蛋白合成作用，能阻抑分裂中期活動(dòng)，而對DNA作用較小，借此可截獲很多中期分裂象，產(chǎn)生類似提高分裂指數(shù)的效應(yīng)。該藥有強(qiáng)烈的毒性，用量過大或作用時(shí)間過長，可使染色體縮短和發(fā)生異常分裂現(xiàn)象。一般用量：秋水仙素O．02～0．8μg／ml營養(yǎng)液；秋水仙胺0．(902～O．08μg／ml營養(yǎng)液，作用時(shí)間2～6h。

2)低溫處理：把指數(shù)生長期細(xì)胞放置到室溫或冰箱中4℃4～12h，因溫度降低時(shí)DNA合成受抑制，細(xì)胞不進(jìn)入分裂期，當(dāng)恢復(fù)用37℃溫箱培養(yǎng)并用秋水仙素后，會(huì)出現(xiàn)代償性分裂高潮，也產(chǎn)生提高分裂象數(shù)效應(yīng)。

2．促染色體分散措施

(1)低滲處理：應(yīng)用低滲鹽溶液處理，可使細(xì)胞體積脹大、染色體松散，便于制備染色體標(biāo)本。低滲可用蒸餾水、1％*、加水稀釋培養(yǎng)液(1：3)、O．075M KCl等方法。目前zui多用的是0．075M KCl，在37℃水浴中作用20～40min，效果。

(2)醋酸固定：大多數(shù)固定劑都使組織細(xì)胞收縮，而醋酸卻有膨脹固定作用，和醇類混合固定有利于染色體松散效應(yīng)?，F(xiàn)多應(yīng)用醋酸／甲醇(1：3)混合液固定，用時(shí)宜現(xiàn)用現(xiàn)配。