將待測蛋白配成合適濃度

    另取3支清潔試管，編號8、9、10，用微量注射器按表6-2操作，將待測蛋白配成系列濃度。

待測蛋白的稀釋

加入G250試劑

    各試管充分混勻后，用取樣器分別加入5.0mL考馬斯亮蘭G250試劑，每加完一管，立即混合（注意不要太劇烈，以免產(chǎn)生大量氣泡而難于消除）。

比色

    各管室溫靜置2～5min后，在分光光度計(jì)上測定595nm處的光吸收值A(chǔ) ₅₉₅ ，空白對照為第1號試管，標(biāo)準(zhǔn)和待測蛋白樣同時(shí)比色。

    注意：不可使用石英比色皿（因不易洗去染色），只能使用玻璃比色皿，使用后立即用少量95%的乙醇潤洗，洗去顏色。

制作標(biāo)準(zhǔn)曲線

    以標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)濃度（mg/mL）為橫座標(biāo)、吸光度值A(chǔ) ₅₉₅ 為縱座標(biāo)作圖，即得到一條標(biāo)準(zhǔn)曲線。

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算待測蛋白濃度

    在標(biāo)準(zhǔn)曲線上，根據(jù)測出的待測樣品的A ₅₉₅ 值，查出試管中蛋白質(zhì)濃度，再按照計(jì)算公式：