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當(dāng)前位置:上海一研生物科技有限公司>>公司動(dòng)態(tài)>>霉菌污染
表現(xiàn):真菌的種類很多,污染的多是曲霉菌,白色念珠菌,酵母菌,黑霉菌,孢子菌等。霉菌污染后多數(shù)在培養(yǎng)液中形成淡黃色或是白色的漂浮物,一般肉眼可見,較易被發(fā)現(xiàn),短期內(nèi)培養(yǎng)液多不變混濁。倒置顯微鏡下可以看見細(xì)胞之間有縱橫交錯(cuò)穿行的絲狀,樹枝狀或管狀菌絲,并漂浮在培養(yǎng)液中。很多菌絲在高倍鏡下可以看見鏈狀排列的菌株。念珠菌及酵母菌菌株呈卵圓形,散在細(xì)胞上及細(xì)胞周邊生長。有時(shí)通過顯微鏡可能會(huì)發(fā)現(xiàn)在培養(yǎng)瓶外壁生長的菌絲,較易誤認(rèn)為污染。發(fā)現(xiàn)瓶外的菌絲后應(yīng)及時(shí)用酒精擦拭干凈。
處理:首先,需確定污染物是細(xì)菌、真菌、支原體,還是酵母?,F(xiàn)在你確認(rèn)是霉菌污染。因此,盡快把污染細(xì)胞與其它細(xì)胞系隔離開,同時(shí)需要對實(shí)驗(yàn)過程中所用的器材和試劑做處理。
一般來說,高濃度的抗生素和抗霉菌素都可能對細(xì)胞或細(xì)胞系有毒性作用,因而,做劑量反應(yīng)實(shí)驗(yàn)確定抗生素和抗霉菌素產(chǎn)生毒性的劑量水平。這點(diǎn)在使用抗生素如*和抗霉菌素如泰樂菌素時(shí)尤其重要。
下面是*的確定毒性水平和消除培養(yǎng)污染的實(shí)驗(yàn)步驟。
1)在無抗生素的培養(yǎng)基中消化、計(jì)數(shù)和稀釋細(xì)胞,稀釋到常規(guī)細(xì)胞傳代的濃度。
2)分散細(xì)胞懸液到多孔培養(yǎng)板中,或幾個(gè)小培養(yǎng)瓶中。在一個(gè)濃度梯度范圍內(nèi),把選擇抗生素加入到每一個(gè)孔中。例如,**下列濃度,0.25,0.50,1.0,2.0,4.0,8.0 mg/ml。
3)每天觀測細(xì)胞毒性指標(biāo),如脫落,出現(xiàn)空泡,匯合度下降和變圓。
4)確定抗生素毒性水平后,使用低于毒性濃度2-3倍濃度的抗生素的培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞2-3代。
5)在無抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞一代。
6)重復(fù)步驟4。
7)在無抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)4-6代,確定污染
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