這次研究主要能夠成功,得益于將試驗老鼠人化,老鼠的基因雖然后很多和人是相似的,但是還是有不同。為了盡量降低人和老鼠之間的差異,這次使用了人ELISA試劑盒和小鼠ELISA試劑盒,用ELISAS試劑盒將人體器官移植到老鼠體內,觀察結果。將老鼠人話后,在對老師進行各種免疫分子的試驗,類風濕關節(jié)炎治療藥物和一種腫瘤誘導免疫耐受中起重要作用的蛋白在這次的試驗中起到了很大的作用。ELISA試劑盒根據抗原抗體結合的不同個可以分為直接法和間接法。
其中直接法又稱為一步法。下面先來介紹直接法,直接法又稱為雙抗體夾心法,此法一般使用于檢測大分子抗原(如蛋白質類抗原),制藥獲得受檢抗原,就可以用雙抗體夾心法來檢測抗原??贵w的抗原一般來源于血清,所以酶標記用的抗體是取自不同物種的動物。ELISAS試劑盒雙抗體夾心法具有很高的特異性,可以將受檢的標本盒酶標記的抗體一起保溫反應,然后進行檢測。不過要注意一點點餓是,類風濕因子,由于自身含有抗體,能和很多動物的抗原相結合,所以在做雙抗體夾心法時,要先排除類風濕因子的干擾。
使用ELISA試劑盒的步驟:
1.在使用之前要將試劑充分的混合均勻,但是要注意在搖晃的時候不要產生過多的泡沫,從而造成有太多的空氣進入試劑中,產生測試誤差。
2.根據要檢測樣品的數量來確定的板條數。每個比對的樣品和空白孔是做復孔,ELISAS試劑盒而樣品的數量就可以自己視情況而定,不過能用復孔的還是用復孔。將標本液體1:1稀釋后倒入50微升的反應孔中。
3.在反應孔中在加入50微升的待測樣品,然后馬上加入50微升的*標記抗體,蓋上模板,輕輕搖晃使其混合均勻后,在37攝氏度的恒溫下等待1小時。
4.將孔內液體甩去,加滿洗滌液,震蕩約30秒后,在甩去洗滌的液體,用紙將水吸干。這樣子重復三次。再在沒空加入80微升的親和鏈酶素-HRP,同上混合均勻后,在37攝氏度的恒溫環(huán)境下等待半小時。
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