檢測(cè)未知抗原
實(shí)驗(yàn)方法原理 親和素是卵白蛋白中提取的一種堿性糖蛋白，對(duì)*有非常高的親和力（結(jié)合常數(shù)高達(dá)1015M-1）。*很易與蛋白質(zhì)（如抗體等）以共價(jià)鍵結(jié)合。這樣，結(jié)合了酶的親和素分子與結(jié)合有特異性抗體的*分子產(chǎn)生反應(yīng)，既起到了多級(jí)放大作用，又由于酶在遇到相應(yīng)底物時(shí)的催化作用而呈色，達(dá)到檢測(cè)未知抗原（或抗體）分子的目的。
實(shí)驗(yàn)材料 *化抗體
試劑、試劑盒 酶標(biāo)記的親和素
實(shí)驗(yàn)步驟
1. 包被抗體：用0.05 mol/L pH9.6碳酸鹽緩沖液將已知抗體作適當(dāng)稀釋，在每個(gè)聚苯乙烯酶標(biāo)板的反應(yīng)孔中加0.1 ml，于4℃（18～24 h）。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3 min（簡(jiǎn)稱洗滌，下同）。
2. 加樣：加入待檢樣品（未知抗原）或作適當(dāng)稀釋的標(biāo)準(zhǔn)參考品于反應(yīng)孔中，同時(shí)作空白孔、陰性和陽(yáng)性孔對(duì)照。37 ℃孵育1 h，洗滌。
3. 加B-Ab：已作適當(dāng)稀釋的*化抗體（B-Ab），每孔加0.1 ml，37 ℃孵育30～60 min。洗滌。
4. 加A-HRP：已作適當(dāng)稀釋的辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的親和素（A-HRP），每孔加0.1 ml，37℃孵育30～45 min。洗滌4次。
5. 底物顯色：于上述各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB（或 OPD）底物應(yīng)用液0.1 ml，于37 ℃孵育10～30 min。再加2mol/L H2SO4 0.05 ml以終止反應(yīng)。
6. 結(jié)果判定：目測(cè)或在ELISA比色儀上測(cè) OD 值（見(jiàn)ELISA部分）。
檢測(cè)未知抗體
實(shí)驗(yàn)方法原理 包被抗原：用0.05 mol/L pH9.6碳酸鹽緩沖液將已知的抗原作適當(dāng)稀釋，于聚苯乙烯酶標(biāo)板的孔中加0.1 ml，于4 ℃放置18～24h。用洗滌緩沖液洗3次，每次3 min。
加樣：加適當(dāng)稀釋的待檢樣品（未知抗體）于反應(yīng)孔中，同時(shí)作空白、陰性和陽(yáng)性對(duì)照孔。37 ℃孵育1 h，洗滌。
加B-Ab2：加稀釋過(guò)的*化抗抗體（抗人或鼠等的IgG），每孔0.1 ml，37 ℃孵育30～60 min，洗滌。余下步驟同測(cè)未知抗原的BA-ELISA。
會(huì)員1.png)