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蛋白質(zhì)電轉(zhuǎn)實(shí)驗(yàn)步驟

閱讀：179發(fā)布時(shí)間：2016-6-17

蛋白質(zhì)電轉(zhuǎn)實(shí)驗(yàn)步驟

1.  剪6塊3 MM 濾紙和一塊NC膜。

2.  將剪好的3 MM 濾紙和NC膜在轉(zhuǎn)移緩沖液中浸泡3-5分鐘。

3.  按下列過程安裝轉(zhuǎn)移裝置，將塑料支架平放在含轉(zhuǎn)移緩沖液的托盤中，在塑料支架上放一塊海綿。

4.  將3塊3MM濾紙對(duì)齊放在海綿上，然后依次將NC膜、凝膠、及另3塊慮紙和海綿放上。

5.  用塑料支架夾緊上述各層，放入電轉(zhuǎn)移槽內(nèi)，NC膜一側(cè)向正極，凝膠一面向負(fù)極。

6.  接通電源電壓120 mA，轉(zhuǎn)移6小時(shí)以上或過夜。

7.  轉(zhuǎn)移結(jié)束后，取出塑料支架，依次取掉各層，用鉛筆在膜的上沿作好標(biāo)記，切下其中一個(gè)孔所對(duì)應(yīng)膜的一半，用氨基黑或考馬士亮蘭染色，檢查轉(zhuǎn)移效果。

8.  將其余的NC膜放在一張干凈的3 MM 濾紙上，室溫干燥30~60分鐘（可不做）。
1.  慮紙及膜的大小不應(yīng)大于待轉(zhuǎn)移膠的大小，否則在轉(zhuǎn)移過程中會(huì)發(fā)生短路，影響轉(zhuǎn)移效果。

2.  操作中應(yīng)戴手套，切不可用手直接觸摸，因手上的汗和分泌物將直接影響到蛋白從膠向膜的轉(zhuǎn)移。

3.  放置NC膜和濾紙時(shí)，每層之間不應(yīng)有氣泡，否則將影響轉(zhuǎn)移效果。

4.  待轉(zhuǎn)移蛋白分子量決定轉(zhuǎn)移時(shí)間，分子量大，轉(zhuǎn)移時(shí)間長(zhǎng)，反之則小。

蛋白質(zhì)電轉(zhuǎn)實(shí)驗(yàn)步驟


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