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重組蛋白質(zhì)生產(chǎn)實(shí)驗(yàn)步驟

閱讀：360發(fā)布時(shí)間：2016-4-25

重組蛋白質(zhì)生產(chǎn)實(shí)驗(yàn)步驟
1.  在懸浮培養(yǎng)液中培養(yǎng)Sf9細(xì)胞，并使之適應(yīng)無(wú)血清培養(yǎng)液。
 
2.  準(zhǔn)備旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶，用于按比例擴(kuò)增Sf9細(xì)胞，將合適大小的兩孔蓋連接在轉(zhuǎn)瓶的一個(gè) 側(cè)臂，另用一平蓋接在另一側(cè)臂。將一段短管（約6英寸或15 cm）裝在通氣孔中，末端連接一濾器，借助張力器用管索將管子與通氣孔和濾器固牢。
 
3.  將一段長(zhǎng)管（30~60 cm）連接至進(jìn)氣孔，并在末端連接一濾器，用管索加固，另一段管子連接于濾器的另一端，用管索固牢。管子末端用鋁箔封好。
 
4.  將與兩孔裝置相對(duì)的側(cè)壁上的蓋子旋轉(zhuǎn)90度以松開(kāi)，高壓滅菌培養(yǎng)瓶1 h。
 
5.  將適應(yīng)了無(wú)血清培養(yǎng)液的細(xì)胞接種于經(jīng)高壓滅菌的培養(yǎng)瓶中。將培養(yǎng)瓶裝至半滿(mǎn)至全滿(mǎn)之間，加入足夠的無(wú)血清培養(yǎng)液以使細(xì)胞終密度達(dá)到5×105~6×105細(xì)胞/ml 至1.5×106細(xì)胞/ml。
 
6.  將培養(yǎng)瓶放在27℃培養(yǎng)箱中的磁力攪拌器上。將攪拌速度設(shè)置在80 r/min。從進(jìn) 氣管的末端移去鋁箔，并將它連接到供氣泵。接通泵的電源，使其流量達(dá)到500~700 ml/min。
 
7.  細(xì)胞生長(zhǎng)至密度約1.5×106細(xì)胞/ml。在層流室中將感染復(fù)數(shù)（MOI）為1~2的病毒通過(guò)側(cè)臂直接加到培養(yǎng)瓶中。 
 
8.  于27℃將培養(yǎng)瓶置于磁力振蕩器上并通氣，確定溫育培養(yǎng)物的時(shí)間。 
 
9.  處理上清得到分泌蛋白或處理細(xì)胞得到胞內(nèi)蛋白。重組蛋白質(zhì)生產(chǎn)實(shí)驗(yàn)步驟


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