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技術(shù)文章

觀察細(xì)胞形態(tài)實驗步驟

閱讀:248發(fā)布時間:2016-3-29

一、方法

 

1.  在平皿中有三張成纖維細(xì)胞貼壁生長的蓋片,在超凈工作臺內(nèi)將一張蓋片移入另一皿中繼續(xù)培養(yǎng),用作對照。

 

2.  在有兩片的平皿內(nèi)加100 μg/ml 的細(xì)胞松弛素B 4滴繼續(xù)培養(yǎng)半小時。

 

3.  將用細(xì)胞松弛素B處理過的兩張蓋片取一張做染色處理,另一張用培養(yǎng)液洗五次(在平皿內(nèi)換五次培養(yǎng)液,每次都要搖動),繼續(xù)培養(yǎng)、觀察。兩小時后細(xì)胞形狀恢復(fù),接近正常。

 

4.  對恢復(fù)的蓋片與*張沒用藥的蓋片一同做染色處理。

 

5.  染色處理

 

(1)將需染色的蓋片放入盛有PBS的平皿內(nèi)用吸管輕輕吹洗蓋片,換液三次,每次3分鐘,洗去培養(yǎng)液。

 

(2)將蓋片移入2%Triton  X-100液,置37℃恒溫箱內(nèi)處理20~30分鐘,以提取骨架以外的蛋白質(zhì),使骨架圖像清晰。

 

(3)立刻將蓋片移入M-緩沖液,換洗三次,每次3分鐘。M-緩沖液有穩(wěn)定細(xì)胞骨架的作用。

 

(4)將蓋片移入3%戊二醛固定15分鐘。

 

(5)將蓋片移入0.2%考馬斯亮蘭染液中,染色15分鐘。然后小心地用自來水沖洗,空氣干燥。

 

二、結(jié)果

 

1.  光鏡觀察,微絲聚集成的張力纖維束被染成藍(lán)色。

 

2.  在沒用藥的標(biāo)本上,成纖維細(xì)胞多數(shù)有突起,微絲沿突起規(guī)則排列。

 

3.  用細(xì)胞松馳素B處理的標(biāo)本,由于微絲被破壞突起縮回,多數(shù)細(xì)胞形狀變圓。

 

4.  用藥處理后又洗去藥的標(biāo)本,由于解除了藥的作用,肌動蛋白重新聚臺形成微絲,細(xì)胞形狀恢復(fù)正常。


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