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當(dāng)前位置:上海酶聯(lián)生物研究所>>公司動態(tài)>>影響ELISA測定成果的標本要素
血清是zui常用的ELISA標本,血漿一般可視為與血清平等的標本,標本引起的假陽性和假陰性成果主要是攪擾性物質(zhì)所造成的,分為內(nèi)源性物質(zhì)和外源性物質(zhì)兩種:
1.內(nèi)源性物質(zhì)有人以為大約40%的人血清標本中含有非特異性攪擾物質(zhì),能夠不同程度影響檢測成果。常見的攪擾物質(zhì)有:類風(fēng)濕因子、補體、嗜異性抗體、嗜靶抗原本身抗體、醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠Ig(s)抗體、穿插反響物質(zhì)和其它物質(zhì)等。
(1)類風(fēng)濕因子
人血清中IgM、IgG型類風(fēng)濕因子(RF)能夠與ELISA體系中的捕獲抗體及酶標記二抗的FC段直接結(jié)合,然后導(dǎo)致假陽性。
處理該狀況的辦法是:
①用F(ab)2代替完好的IgG;
②標本用聯(lián)有熱變性(63℃,10min)IgG的固相吸附劑處理(將熱變性IgG加入到標本稀釋液中相同有效);③檢測抗原時,能夠用2-巰基乙醇等加入到標本稀釋液中,使RF降解。
(2)補體ELISA體系中固相一抗和標記二抗過程中,抗體分子發(fā)作變構(gòu),其FC段的補體C1q分子結(jié)合位點被露出出來,使C1q能夠?qū)⒍哌B接起來,然后構(gòu)成假陽性。處理的辦法是:①用EDTA稀釋標本;②用53℃,10min或56℃,30min加熱血清使C1q滅活。
(3)嗜異性抗體人類血清中含有能與嚙齒類動物(如鼠等)Ig(s)結(jié)合的天然嗜異性抗體,可將ELISA體系中一抗和二抗連接起來,也能構(gòu)成假陽性。處理的辦法是:可在標本稀釋液中加入過量的動物Ig(s),但加入量缺乏或亞類不一起無效。
(4)嗜靶抗原的本身抗體抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素等嗜靶抗原的本身抗體,有時能與靶抗原結(jié)合構(gòu)成復(fù)合物,在ELISA辦法中均可攪擾抗原抗體測定成果。為防止以上狀況呈現(xiàn),處理的辦法是:測定前需用理化辦法將其解離后再測定。
(5)醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠Ig(s)抗體臨床標本展開的用鼠源性CD3等單克隆抗體醫(yī)治,用放射性同位素標記鼠源性抗體的印象確診及靶向醫(yī)治等新技術(shù),均有可能使這些患者體內(nèi)發(fā)生抗鼠抗體;別的,被鼠等嚙齒類動物咬傷的患者體內(nèi)也能夠發(fā)生抗鼠Ig(s)抗體。這些患者ELISA測守時均可發(fā)生假陽性。處理的辦法是:測定抗原時,在標本中加入足量的正常鼠Ig(s),然后戰(zhàn)勝因為上述原因構(gòu)成的假陽性。
(6)穿插反響物質(zhì)類、類AFP樣物質(zhì)等,是與靶抗原有穿插反響的物質(zhì)。在用多抗測定抗原時對測定成果影響不大,但在用單克隆抗體測定抗原時,假如穿插抗原決定簇正好是所用單克隆抗體相對應(yīng)的靶決定簇時,也會呈現(xiàn)假陽性成果。
(7)標本中其它成分的影響血清脂質(zhì)過高、*、血紅蛋白及血液粘度過大等,均對ELISA測定成果有攪擾效果。
2.外源性物質(zhì)
外源性物質(zhì)常常是因為用于ELISA測定的血標本的采集、儲存等不妥所造成的。如標本溶血、標本被細菌污染、標本儲存過久、標本凝集不全和*中添加物等影響。
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