因此有些廠家為了保持較好的本底采用了單片段基因工程抗原及合成肽包被，該類試劑盒的流行病學(xué)敏感度不夠，穩(wěn)定性也成問題。也有廠家堅持試劑盒高的流行病學(xué)敏感度，科學(xué)地對待反應(yīng)結(jié)果。動物ELISA試劑盒診斷試劑經(jīng)歷了從合成肽向基因工程抗原的過渡。由于歷史的原因，人們往往以反應(yīng)本底的好壞來衡量ELISA反應(yīng)試劑盒，基因工程抗原較合成肽抗原有*的*性，就HCV-ELISA試劑盒來講，*代產(chǎn)品為合成肽抗原，主要是HCV特異性抗原決定簇的肽片段;第二代產(chǎn)品包被的抗原既有基因工程抗原又有合成肽，只是當(dāng)時的基因工程抗原不全，僅包括了HCV 的核心區(qū)片段;第三代產(chǎn)品基本上采用了基因工程抗原，而且這些抗原包括更多、更穩(wěn)定、純度更高的HCV 特異性抗原。第三代試劑的敏感度大大提高了。

基因工程抗原與合成肽抗原的區(qū)別如下：

? 選擇試劑時應(yīng)選擇靈敏度高、特異性好、穩(wěn)定性好、批間差小、操作方便省時的優(yōu)良檢測試劑，國家參比實驗室每年對各廠家的試劑進行質(zhì)量評估并定期公布評估結(jié)果，可作為選擇試劑的主要依據(jù)。

? 要注意試劑的批號和出廠日期，雖然試劑的有效期多為1年。選擇剛出廠的試劑使用。

不同廠家的試劑不能混用。

   不同方法學(xué)的檢測試劑，會使兩對半結(jié)果出現(xiàn)一些不同。例如：在實際工作中常用 ELISA檢測HBsAg結(jié)果為陰性，而電化學(xué)發(fā)光檢測為陽性。除方法學(xué)的靈敏度外;動物ELISA試劑盒還存在使用單抗或多克隆抗體試劑的差別。單抗對變異抗原或亞型乙肝標(biāo)志物檢測存在差異，建議試劑廠家對劑的制備應(yīng)該考慮亞型及型濃度的問題。

3、操作技術(shù)的影響

操作過程的控制：

⑴ 嚴(yán)格按照試劑說明書。操作前將試劑在室溫下平衡30～60min。

⑵ 加樣后及時放人孵箱。標(biāo)本較多時，要分批操作。按說明步驟嚴(yán)格控制操作時間，防止孵育時間人為延長，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍，難以清洗*。

(3)封板溫育時，各孔一定要封嚴(yán)，防止陽性標(biāo)本的液體蒸發(fā)，產(chǎn)生周邊現(xiàn)象從而導(dǎo)致“花板"的出現(xiàn)。

(4)用洗板機洗板時，保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干：還要防止針口有纖維蛋白或異物，這些異物在洗板的過程中易產(chǎn)生拖帶現(xiàn)象而導(dǎo)致“花板"的出現(xiàn)。

(5)合理安排檢測量，以免反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。

(6)加酶試劑后用吸水紙在酶標(biāo)板表面輕拭吸干。

(7)顯色劑盡量在臨用前配制，堅持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用。

(8)加樣時保持顯色劑不外流;A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。動物ELISA試劑盒加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。

(9)應(yīng)保證C清潔，整個操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸。以上的措施可以使“花板"降至zui低限度。從而提高檢測的特異性。并得到更準(zhǔn)確、可靠的實驗結(jié)果。