兔胰島素(INS)elisa試劑盒說明書
實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中兔胰島素(INS)水平。用純化的兔胰島素(INS)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入胰島素(INS)，再與HRP標記的胰島素(INS)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的胰島素(INS)呈正相關(guān)。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中兔胰島素(INS)濃度。
操作步驟
1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
20 mIU/L 5 號標準品 150?l 的原倍標準品加入 150?l 標準品稀釋液
10 mIU/L 4 號標準品 150?l 的 5 號標準品加入 150?l 標準品稀釋液
5 mIU/L 3 號標準品 150?l 的 4 號標準品加入 150?l 標準品稀釋液
2.5 mIU/L 2 號標準品 150?l 的 3 號標準品加入 150?l 標準品稀釋液
1.25 mIU/L 1 號標準品 150?l 的 2 號標準品加入 150?l 標準品稀釋液
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同） 、標準孔、待測樣品孔。 在酶標包被板上標準品準確加樣 50?l， 待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40?l，然后再加待測樣品 10?l（樣品zui終稀釋度為 5 倍） 。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此
重復(fù) 5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑 50?l，空白孔除外。
7. 溫育：操作同 3。
8. 洗滌：操作同 5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50?l，再加入顯色劑 B50?l，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液 50?l，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色） 。
