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公司動態(tài)

實體組織分散為單個細胞

閱讀:160發(fā)布時間:2016-7-25

實體組織分散為單個細胞

 

    在實體組織分散為單個細胞的過程中,解離的方法可能瞬時地或者持久地影響細胞的性質(zhì)。細胞性質(zhì)的變化在形態(tài)上可能是顯而易見的。例如細胞膜的破損,細胞表面出現(xiàn)泡狀物等。但有些細胞性質(zhì)的變化是很難被觀察到的,例如線粒體活性的變化;選擇性表面抗原的丟失;蛋白的丟失等。細胞被損傷的程度受到實驗條件,例如溫度、pH值、處理時間等因素的影響。因此,從組織中分散出的單個細胞,在某些性質(zhì)上與原來組織中的細胞是不同的。所以,對分散出的單個細胞還應進一步研究,努力改進組織分散的方法。在此提出以下幾個分散原則。

1、分散出的細胞群體與體內(nèi)原位組織有類似性。例如分化細胞與未分化細胞之比;增殖細胞與靜止細胞之比;細胞周期各時相細胞之比;帶有某個特征的細胞亞群所占的比例等。組織解離過程中,不應造成某種類型細胞的過多丟失。

2、分散出的細胞常用于進行DNA的含量分析,因此要求細胞不要成團,碎片很少,DNA分布圖的變異系數(shù)低,以便于準確地估計各周期時相的百分數(shù)。

3、為了對活細胞進行細胞功能研究,分散出的細胞群體應保持克隆生成能力,并能保持原細胞的功能。如應保持細胞膜的完整性,細胞內(nèi)pH值,細胞膜電位,線粒體的活性等。

目前。檢測這些細胞功能的熒光探針和檢測細胞結(jié)構(gòu)特征(如細胞內(nèi)各種大分子物質(zhì)的含量)的熒光探針都在不斷發(fā)展,對于一個細胞用幾種熒光探針標記,進行多參數(shù)測量,可以更準確地識別和分離細胞亞群。

    4、有些實驗系統(tǒng)要求分散的細胞保持體內(nèi)組織的結(jié)構(gòu)和形態(tài)特征。例如對小腸組織進行細胞動力學分析時,根據(jù)隱窩細胞較短,并且處于增殖狀態(tài),或絨毛細胞較長和處于非增殖狀態(tài),可區(qū)分出兩個不同的細胞亞群。因此,分散時要求保持細胞的形態(tài)學特征。如果只是對腫瘤的細胞懸液進行DNA含量分析,則不需要保持形態(tài)學特征。實際利用細胞核懸液也可以獲得很好的DNA組放圖。

    5、為了對同一細胞懸液進行多次的重復測量,希望能獲得較高的細胞產(chǎn)額。雖然細胞產(chǎn)額會受到組織內(nèi)細胞大小,細胞間基質(zhì)等因素的影響。一般來說:1克組織含有大約1×109細胞,少數(shù)的細胞分散方法,細胞產(chǎn)額為每克組織多于1×108細胞,多數(shù)細胞分散方法細胞產(chǎn)額為每克組織約1×106—1×107個細胞。


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