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elisa檢測(cè)試劑盒

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谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT)活性測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)

閱讀:242發(fā)布時(shí)間:2016-5-3

谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT活性測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)

                      分光光度法 50 管/24 樣

測(cè)定意義

    GPTEC 2.6.1.2廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,催化氨基酸和酮酸轉(zhuǎn)氨 基反應(yīng),在氨基酸代謝中具有重要作用。此外,哺乳動(dòng)物肝細(xì)胞 GPT 活性很高當(dāng)肝細(xì)胞 壞死,GPT 釋放到血液中,血清 GPT 活性顯著增高。因此GPT 被世界衛(wèi)生組織推薦為肝 功能損害zui敏感的檢測(cè)指標(biāo)。

測(cè)定原理

    GPT 催化*和α-酮戊二酸發(fā)生轉(zhuǎn)氨基反應(yīng),生成丙酮酸和*;加入 2,4-二硝基苯肼 溶液,不僅終止上述反應(yīng),而且與酮酸中的羰基加成,生成丙酮酸苯腙;苯腙在堿性條件下 呈紅棕色,可以在 505nm 讀取吸光值并計(jì)算酶活力。

試驗(yàn)中所需的儀器和用品

可見(jiàn)分光光度計(jì)、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸 餾水。

試劑的組成和配制

提取液30mL×1 瓶4℃保存。

試劑一液體 5 mL×1 瓶, 4℃存; 試劑二液體 5 mL×1 瓶, 4℃存; 試劑三液體 50 mL×1 瓶,4℃存;

測(cè)定操作表

1、分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 505nm,蒸餾水零。 2、在 EP 管中加入下列試劑

試劑名稱μL

測(cè)定管

 

對(duì)照管

 

 

 

 

待測(cè)樣本

20

 

 

 

 

 

 

試劑一

100

 

100

 

 

 

 

混勻后,37哺乳動(dòng)物25其它物種預(yù)熱 30min

 

 

 

 

 

試劑二

100

 

100

 

 

 

 

待測(cè)樣本

 

 

20

 

 

 

混勻后37哺乳動(dòng)物25其它物種準(zhǔn)確水浴 20min

 

 

 

 

試劑三

1000

 

1000

混勻,室溫放置 10min,505nm 波長(zhǎng)處測(cè)各管吸光度。每個(gè)測(cè)定管需設(shè)一個(gè)對(duì)照管。

計(jì)算

1、以相對(duì)吸光值A 測(cè)定管-A 對(duì)照管為橫坐標(biāo),相應(yīng)酶活力單位U/L為縱坐標(biāo)。作 標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=605.07χ2+192.86χ+0.1392×0.482

2、血清中 GPT 活力(U/L)= 0.482×605.07χ2+192.86χ+0.1392。χ A 測(cè)定管-A 對(duì)照管。

 3、微生物、細(xì)胞或組織中 GPT 活力(U/g 蛋白)=0.482×605.07χ2+192.86χ+0.1392÷待測(cè)勻 漿蛋白濃度g/L。χA 測(cè)定管-A 對(duì)照管。

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