谷丙轉(zhuǎn)氨酶（GPT）活性測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)
分光光度法 50 管/24 樣
測(cè)定意義
GPT（EC 2.6.1.2）廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，催化氨基酸和酮酸轉(zhuǎn)氨 基反應(yīng)，在氨基酸代謝中具有重要作用。此外，哺乳動(dòng)物肝細(xì)胞 GPT 活性很高，當(dāng)肝細(xì)胞 壞死，GPT 釋放到血液中，血清 GPT 活性顯著增高。因此，GPT 被世界衛(wèi)生組織推薦為肝 功能損害zui敏感的檢測(cè)指標(biāo)。
測(cè)定原理
GPT 催化*和α-酮戊二酸發(fā)生轉(zhuǎn)氨基反應(yīng)，生成丙酮酸和*；加入 2,4-二硝基苯肼 溶液，不僅終止上述反應(yīng)，而且與酮酸中的羰基加成，生成丙酮酸苯腙；苯腙在堿性條件下 呈紅棕色，可以在 505nm 讀取吸光值并計(jì)算酶活力。
試驗(yàn)中所需的儀器和用品
可見(jiàn)分光光度計(jì)、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸 餾水。
試劑的組成和配制
提取液：30mL×1 瓶，4℃保存。
試劑一：液體 5 mL×1 瓶， 4℃存； 試劑二：液體 5 mL×1 瓶， 4℃存； 試劑三：液體 50 mL×1 瓶，4℃存；
測(cè)定操作表：
1、分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 505nm，蒸餾水零。 2、在 EP 管中加入下列試劑
試劑名稱（μL） | 測(cè)定管 | | 對(duì)照管 |
| | | |
待測(cè)樣本 | 20 | | |
| | | |
試劑一 | 100 | | 100 |
| | | |
混勻后，37℃（哺乳動(dòng)物）或 25℃（其它物種）預(yù)熱 30min | |
| | | |
試劑二 | 100 | | 100 |
| | | |
待測(cè)樣本 | | | 20 |
| | |
混勻后，37℃（哺乳動(dòng)物）或 25℃（其它物種）準(zhǔn)確水浴 20min |
| | | |
試劑三 | 1000 | | 1000 |
混勻，室溫放置 10min，在 505nm 波長(zhǎng)處，測(cè)各管吸光度。每個(gè)測(cè)定管需設(shè)一個(gè)對(duì)照管。
計(jì)算
1、以相對(duì)吸光值（A 測(cè)定管-A 對(duì)照管）為橫坐標(biāo)，相應(yīng)酶活力單位（U/L）為縱坐標(biāo)。作 標(biāo)準(zhǔn)曲線為：y=（605.07χ2+192.86χ+0.1392）×0.482
2、血清中 GPT 活力(U/L)= 0.482×（605.07χ2+192.86χ+0.1392）。χ為 A 測(cè)定管-A 對(duì)照管。
3、微生物、細(xì)胞或組織中 GPT 活力(U/g 蛋白)=0.482×（605.07χ2+192.86χ+0.1392）÷待測(cè)勻 漿蛋白濃度（g/L）。χ為 A 測(cè)定管-A 對(duì)照管。
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